茶多酚硬脂酸酯凝胶剂的制备及质量控制研究

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茶多酚(Tea Polyphenols, TPs)是茶叶中儿茶素类成分的混合物,其中(-)表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)Epigallocatechin Gallate,L-EGCG]是其中最主要的功能和活性成分。现有研究表明TPs毒副作用极低,具有抗氧化、抗癌、抗病毒、降血压、对皮肤的保护与治疗等多种药理作用[3-4]。由于基本母核上含有多个酚羟基,TPs表现出脂溶性差、透皮吸收与透膜能力弱导致生物利用度差及易被氧化导致产品不稳定等缺点,这些缺点限制了TPs更广泛的应用。为了克服TPs上述缺点以进一步扩大其应用范围,人们在尽量保持其活性的前提下,通过化学改性研制出TPs的酯化物—脂溶性茶多酚(Lipo-soluble tea polyphenols, LTPs),国内外近年研究发现茶多酚的脂化物药理作用广泛[5],毒副作用极低,目前主要用作食品抗氧化剂,作为治疗性药物应用的报道较少。茶多酚硬脂酸酯(Teapolyphenols stearate, TPs-stearates)是目前市场上流通的LTPs主要产品之一。有文献报道茶多酚的脂化物对皮肤具有保护与治疗作用,为了探索茶多酚硬脂酸酯外用对某些皮肤疾病的治疗作用,本课题围绕茶多酚硬脂酸酯凝胶剂的制备及其质量控制方法进行研究。本课题对茶多酚硬脂酸酯进行了定性分析;通过对基质和茶多酚硬脂酸酯溶剂的选择,优化了茶多酚硬脂酸酯凝胶剂的处方及制备工艺:取10.0g卡波姆均匀撒于500mL煮沸并放冷的双蒸水表面,溶胀过夜,得透明凝胶基质;精密称量5.0g茶多酚硬脂酸酯,用80mL无水乙醇溶解,加入10.0g氮酮,充分振荡使其溶解并转移至基质中,混合均匀;再向基质中依次加入100.0g丙二醇和100.0g甘油混合均匀;最后慢加快搅地加入三乙醇胺10.0g,并加双蒸水至1000.0g,即得0.5%茶多酚硬脂酸酯凝胶剂。通过对影响凝胶剂稳定性的因素如离心、高湿、高温、低温、强光照射等进行单因素考察,初步确定了该制剂的储存条件,为密闭低温避光条件下保存。采用比色法对茶多酚硬脂酸酯原料药及其制剂进行了含量测定,并对该测定方法进行了优化:通过将标准品由没食子酸乙酯,更换成对照品茶多酚硬脂酸酯、L-EGCG-硬脂酸酯和L-EGCG-棕榈酸酯,采用现配现用的酒石酸亚铁溶液作为显色剂。该三种对照品显色后的溶液,在400nm-800nm波长内扫描,均在540nm波长处有最大吸收;经优化后的该法,以茶多酚硬脂酸酯作为对照品,测得的茶多酚硬脂酸酯含量较以没食子酸乙酯为标准品时高;以高纯度茶多酚硬脂酸酯原料药作为对照品,当茶多酚硬脂酸酯在浓度5250mg·(100mL)-1范围内,符合朗伯比尔定律,以浓度C [mg·(100mL)-1]为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为A=0.0968C+0.0091,线性关系良好(R2=0.9997)。以L-EGCG-硬脂酸酯作为对照品,在浓度5~250mg·(100mL)-1范围内,符合朗伯比尔定律,以浓度C [mg·(100mL)-1]为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准曲线,得线性回归方程为:A=0.1221C+0.0075,线性关系良好(R2=0.9985);单位浓度的L-EGCG-硬脂酸酯显色液的吸光度是单位浓度茶多酚硬脂酸酯显色液吸光度的1.2614倍;经调整后的线性回归方程为A=0.1221C+0.0115。以L-EGCG-棕榈酸酯作为对照品,在浓度5~250mg·(100mL)-1范围内,符合朗伯比尔定律,以浓度C [mg·(100mL)-1]为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准曲线,得线性回归方程为:A=0.1229C+0.0044,线性关系良好(R2=0.9983),单位浓度的L-EGCG-棕榈酸酯显色液的吸光度是单位浓度茶多酚硬脂酸酯显色液吸光度的1.2696倍,经调整后的线性回归方程为A=0.1229C+0.0116。本课题也研究了用紫外法对茶多酚硬脂酸酯原料药及其制剂进行定量分析的方法,分别以茶多酚硬脂酸酯、L-EGCG-硬脂酸酯和L-EGCG-棕榈酸酯作为对照品,以无水乙醇为溶剂,在200-500nm波长范围内进行扫描,均在274.80nm波长处有最大吸收。以茶多酚硬脂酸酯作为对照品,在274.80nm波长处测定吸光度,以浓度C(μg·mL-1)作横坐标,吸光度(A)作纵坐标,绘制标准曲线,得线性回归方程:A=0.0085C+0.0032,线性关系良好(R2=0.9987);以L-EGCG-硬脂酸酯作为对照品测定茶多酚硬脂酸酯含量,在浓度10~100μg·mL-1浓度范围内,以浓度C(μg·mL-1)作横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准曲线,得线性回归方程为:A=0.0092C-0.0019,线性关系良好(R2=0.9987);单位浓度的L-EGCG-硬脂酸酯吸光度是单位浓度茶多酚硬脂酸酯吸光度的1.0824倍;经调整后的线性回归方程为:A=0.0092C+0.0035;以L-EGCG-棕榈酸酯作为对照品测定茶多酚硬脂酸酯含量,在浓度10100μg·mL-1范围内,以L-EGCG-棕榈酸酯作为对照品来测定茶多酚硬脂酸酯含量,以浓度C(μg·mL-1)为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准曲线,得线性回归方程为:A=0.0106C+0.0028,线性关系良好(R2=0.9986);单位浓度的L-EGCG-棕榈酸酯吸光度是单位浓度茶多酚硬脂酸酯吸光度的1.2471倍;经调整后的线性回归方程为: A=0.0106C+0.0040。
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