苦瓜素类化合物是从苦瓜茎叶中分离纯化出的一类葫芦烷型四环三萜类具杀虫活性的化合物,包括苦瓜素Ⅰ、苦瓜素Ⅱ和苦瓜皂苷元L等。研究表明,这些化合物对多种农业害虫的取食、产卵和生长发育有抑制作用,但对亚洲玉米螟幼虫血浆蛋白的影响尚未见报道。为了探究苦瓜素类化合物对亚洲玉米螟生长发育影响的作用机理,以期为亚洲玉米螟的防治和新型杀虫剂的研制提供科学的依据,本文通过测定苦瓜叶正丁醇萃取物和苦瓜素Ⅰ对亚洲玉米螟幼虫体重增长的抑制作用及其对能量物质代谢的影响,确定了苦瓜素类化合物对害虫的作用方式为抑制其生长发育。进一步测定了苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ等苦瓜素类化合物对亚洲玉米螟幼虫离体酚氧化酶活性的抑制作用及其对亚洲玉米螟幼虫血浆蛋白表达的影响,研究结果如下:1.苦瓜叶正丁醇萃取物对亚洲玉米螟幼虫能量物质代谢的影响采用饲料混药法,测定了苦瓜正丁醇萃取物对亚洲玉米螟幼虫能量物质的影响。苦瓜叶正丁醇萃取物对幼虫体重增长抑制率随着处理浓度的增加而升高。苦瓜叶正丁醇萃取物在处理的3d内,幼虫血淋巴总蛋白的含量显著降低,总糖含量明显增加,但对幼虫脂质含量的影响不明显。2.苦瓜素Ⅰ对亚洲玉米螟幼虫能量物质代谢的影响采用饲料混药法,测定了苦瓜素Ⅰ对亚洲玉米螟幼虫能量物质的影响,结果表明苦瓜素Ⅰ对幼虫体重的增加有显著的抑制作用。苦瓜素Ⅰ可显著降低幼虫血淋巴总蛋白含量,但对幼虫血淋巴总糖含量的影响不显著。3.苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ对亚洲玉米螟幼虫离体酚氧化酶活性的影响采用硫酸铵沉淀法对亚洲玉米螟酚氧化酶进行纯化,得到的初纯化的离体酚氧化酶酶纯化倍数为2.50,酶活力回收率为92.61%。采用酶标仪微量法,以左旋多巴为底物,首先测定了丙酮、甲醇、乙醇、二甲基亚砜等几种常用有机溶剂对离体酚氧化酶活性的影响,结果发现当二甲基亚砜含量小于7.5%时,亚洲玉米螟幼虫离体酚氧化酶的相对活力在97%以上,对亚洲玉米螟幼虫离体酚氧化酶活性的影响最小。随后,将苦瓜素Ⅰ、苦瓜素Ⅱ分别溶于二甲基亚砜中,保持二甲基亚砜的终浓度为5%,测定其对亚洲玉米螟幼虫离体酚氧化酶活性的影响。结果表明,苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ均对亚洲玉米螟幼虫离体酚氧化酶活性有明显的抑制作用,抑制中浓度IC50分别为180.45μg/m L和1126.00μg/mL,苦瓜素Ⅰ的抑制作用明显强于苦瓜素Ⅱ。4.苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ对亚洲玉米螟幼虫血淋巴蛋白质表达的影响用含3mg/g的苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ的饲料饲喂亚洲玉米螟幼虫2d后,采用双向电泳2-DE技术和MALDI-TOF/TOF质谱分析法对幼虫血浆蛋白进行鉴定分析。结果表明,苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ均对亚洲玉米螟血浆蛋白表达有明显的影响。经苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ处理的亚洲玉米螟幼虫血浆蛋白质图谱上的蛋白质点均明显少于对照组,苦瓜素Ⅰ处理的亚洲玉米螟幼虫血浆蛋白点比对照减少了226个,苦瓜素Ⅱ处理的亚洲玉米螟幼虫血浆蛋白质点比对照减少331个。比较苦瓜素Ⅰ处理组和对照组的蛋白点表达差异,蛋白质含量差异倍数大于1.2倍的蛋白点有5个斑点,均为表达增加;其中,表达上调蛋白点4被成功鉴定为Keratin。比较苦瓜素Ⅱ处理组和对照组的蛋白点表达差异显著的有4个斑点,均为表达减少;其中,表达减少的蛋白点7被成功鉴定为E-race odorant receptor 4,可能与亚洲玉米螟幼虫的气味受体有关。