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[目的]研究c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路在庆大霉素(Gentamycin,GM)耳毒性中的作用,并基于此作用探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对庆大霉素耳毒性的干预机制,为川芎嗪防治药物性耳聋的机制提供补充。[方法]①筛选健康活泼、耳廓反射灵敏的白毛红目豚鼠48只,随机分成生理盐水组、庆大霉素造模组(GM组)、川芎嗪防治组(GM+TMP组)和川芎嗪对照组(TMP组)。GM组:肌注硫酸庆大霉素120mg·kg-1·d-1;GM+TMP组:肌注硫酸庆大霉素120 mg·kg-1·d-1及腹腔注射盐酸川弯嗪30mg·kg-1·d-1;TMP组:腹腔注射盐酸川芎嗪30mg·kg-1·d-1;生理盐水组:肌注与GM组等量的生理盐水。所有组均连续给药13天。每组豚鼠首次用药前及末次用药后第一天均行短声听性脑干反应(click auditory brainstem response,click ABR)测试,实验结束后所有豚鼠断头处死,收集耳蜗标本。②从click ABR的阈值、80dB nHL给声强度下的Ⅲ波潜伏期和幅值检测豚鼠听力情况。③从病理层面进行疗效和机制研究:耳蜗切片HE染色,观察耳蜗Corti氏器和螺旋神经节内细胞的结构。④从蛋白、基因水平进行分子机制研究:Western blot法检测耳蜗组织JNK、磷酸化的JNK(phosphorylation of c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)蛋白表达量:Real-time PCR法检测JNK的mRNA含量。[结果]①click ABR检测结果显示,用药前各组听阈无显著性差异(P>0.05)。用药后GM组和GM+TMP组的听阈显著性升高,与生理盐水组相比均P<0.01;TMP组的ABR阈值与生理盐水组的ABR阈值无统计学差异P>0.05;GM+TMP组阈值虽也有升高,但较GM组明显降低,差异亦有统计学意义(P<0.01)。②耳蜗切片HE染色显示,生理盐水组耳蜗组织形态正常;GM组Corti氏器严重变形,外毛细胞(outer hair cell,OHC)肿胀、变形,螺旋神经节内有大量细胞缺失,出现空泡样变;GM+TMP组Corti氏器毛细胞散在缺失,螺旋神经节形态结构均有不同程度病理改变、细胞数量有所减少,但均较GM组损伤轻;TMP组Corti氏器中的毛细胞和螺旋神经节上的细胞其形态结构均基本完整、变化较轻。③Westernblot法测蛋白表达显示,在JNK蛋白表达上,经单因素方差分析及各组间的两两比,可得到各组间JNK蛋白分布程度依次为:GM组>TMP组≈生理盐水组≈GM+TMP组;而在单独的分子量54KD的JNK2(JNK的亚族2)蛋白表达上,各组分布程度依次为GM组>GM+TMP组≥生理盐水组≈TMP组;GM+TMP组中JNK1(JNK的亚族1)的表达量与生理盐水组、TMP组相比无明显差异(P>0.05)。在p-JNK表达上,给药后GM组与GM+TMP组的p-JNK蛋白表达量均明显升高(与生理盐水组相比,P<0.05),且GM组上升量最大,与GM+TMP组的差值亦有统计学意义(P<0.05);但在p-JNK1(磷酸化的JNK亚族1)蛋白表达上,各组的表达量差异却无统计学意义(P>0.05);并且各组间p-JNK2(磷酸化的JNK亚族2)蛋白分布程度依次为GM组>GM+TMP组>生理盐水组≈TMP组,与p-JNK在各组间的表现相同。④Real-time PCR法检测JNK在mRNA转录水平上的表达,经单因素方差分析及各组间的两两比可得,给药后GM组与GM+TMP组、生理盐水组、TMP组相比,JNK基因表达量均明显升高(P<0.05),且GM+TMP组、生理盐水组、TMP组两两之间差值无统计学意义(P>0.05)。⑤相关性分析可以看出JNK2、p-JNK2、p-JNK蛋白水平表达量,JNK mRNA转录水平表达量均与click ABR阈值有着明显的直线相关趋势(P<0.05)。而JNK1、p-JNK1、JNK蛋白水平表达量与click ABR阈值的相关性无统计学意义(P>0.05)。[结论]①庆大霉素具有耳毒性,可导致耳蜗组织形态异常;ABR阈值升高、同等给声强度下Ⅲ波潜伏期延后和幅值降低;JNK mRNA表达异常上调,JNK2、p-JNK2蛋白水平上的表达也异常增高。②JNK2、p-JNK2、p-JNK蛋白水平表达量上升、JNK mRNA表达量增加均与click ABR阈值升高成正相关,与形态学表现一致。③TMP可以降低由庆大霉素导致的ABR阈值升高、抑制JNK2的磷酸化、下调JNK在基因与蛋白水平上的表达,可能通过影响JNK信号途径发挥防治作用。