增液汤调控神经肽VIP的表达治疗干燥综合征的机制研究

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:djf344010190
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目的探讨增液汤治疗干燥综合征的中医理论基础;探讨增液汤治疗干燥综合征是否通过上调神经肽VIP的表达发挥作用,从而调节该疾病Th1/Th2、Th17/Treg免疫失衡及AQP5表达异常。方法理论研究分成两个部分,分别梳理相关文献探讨干燥综合征的病因与病机。实验研究分成四个部分。第一部分,检测NOD小鼠唾液流率,Elisa法检测血清中细胞因子IFN-γ和IL-10的表达,并对NOD小鼠一侧颌下腺作HE染色,RT-PCR法检测另一侧颌下腺中IFN-γ、IL-10和VIP mRNA的表达,从而观察增液汤对NOD小鼠颌下腺的保护作用以及其能否上调颌下腺中VIP的表达。第二部分,给予NOD小鼠腹腔注射VIP,观察其对小鼠的唾液流率、颌下腺病理、颌下腺中IFN-γ、IL-10、IL-17A和AQP5表达的影响。第三部分,体外培养SD大鼠的颌下腺细胞,在培养液中加入VIP及相关抑制剂,免疫荧光及Western blot法检测VIP对SD大鼠乳鼠颌下腺细胞AQP5的表达的影响,并且探讨这种调节作用是否通过VIP/cAMP/PKA/AQP5信号通路。第四部分,通过同时给予NOD小鼠增液汤及VIP受体拮抗剂,Elisa法检测模型小鼠血清中1IFN-γ、IL-10和IL-17A等细胞因子,对NOD小鼠一侧颌下腺作HE染色,RT-PCR法检测另一侧颌下腺中IFN-γ、IL-10、 IL-17A和VIP mRNA的表达,免疫组化检测颌下腺中AQP5的表达,从而探讨增液汤治疗干燥综合征中调节Th1/Th2、Th17/Tre g免疫失衡及AQP5表达异常是否通过上调VIP的表达实现。结果1理论研究结果干燥综合征很难找到引起疾病的直接病因,但是可以通过审证求因,寻找到疾病的第二病因。干燥综合征的第二病因有燥毒、瘀血等,而这些第二病因可能与现代医学的免疫异常存在关联,并指出祛除第二病因在治疗干燥综合征中有着重要的意义。另外,干燥综合征病机核心是津液代谢障碍,津液代谢障碍会影响脏腑结构与功能,而正常脏腑的功能对津液的生成与输布起着重要的作用,所以通过调节脏腑功能从而改善津液代谢是治疗干燥综合征的必要性以及取得疗效的可能性。津液代谢障碍可能与现代医学研究AQPs表达异常相关。增液汤治疗干燥综合征取得疗效的理论基础在于其既能祛除第二病因,又可调节脏腑功能从而改善津液生成与输布。2实验研究结果2.1增液汤可以改善NOD小鼠的唾液流率、颌下腺病理、血清及颌下腺中IFN-γ/IL-10免疫失衡,并能上调颌下腺中VIPmRNA的表达2.2 VIP可以改善NOD小鼠的唾液流率,颌下腺病理,降低IFN-γ/IL-10和IL-17A/IL-10两者比值,并能上调颌下腺中AQP5的表达。2.3 VIP可以上调SD大鼠颌下腺中AQP5的表达,这种上调过程可被cAMP抑制剂、PKA抑制剂所拮抗,从而说明SD大鼠的颌下腺中可能存在VIP/cAMP/PKA/AQP5的信号通路。2.4拮抗NOD小鼠VIP受体后,增液汤不能改善颌下腺的病理,不能改善血清及IFN-γ/IL-10、IL-17/IL-10免疫失衡,不能被上调颌下腺的AQP5的表达。结论:在理论方面,燥毒、瘀血等第二病因是干燥综合征的主要病因,脏腑功能失调津液代谢障碍是干燥综合征的病机核心。增液汤具有解毒润燥养阴生津的功效,既可以祛除第二病因,又能调节脏腑功能增强津液的生成与输布。理法相合是增液汤取得良好疗效的理论依据。在实验方面,增液汤能保护NOD小鼠的颌下腺,改善干燥综合征模型小鼠Th1/Th2、Th17/Treg免疫失衡及颌下腺中AQP5表达异常,且这种改善过程可能与增液汤上调VIP表达相关。
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