实验背景:TRAIL是肿瘤坏死因子家族的新成员,其特性是能选择性地诱导多种肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞无杀伤作用。作为一种新型的肿瘤治疗生物制剂,具有良好的临床应用前景。但白血病细胞表现为对其敏感性减低或耐受,目前已发现其主要机制与TRAIL受体水平的缺陷、突变,相关凋亡蛋白异常,死亡诱导信号复合物功能减退和凋亡抑制蛋白家族高表达引起的caspase抑制等。但最近国外有文章报道TRAIL在诱导Jurkat细胞凋亡的同时,也可以激活PI-3K/AKT和NF-kB细胞增殖通路,从而影响了其凋亡敏感性。基于此点,本研究从增殖角度探讨白血病细胞对TRAIL抵抗的机制。实验目的:检测白血病细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性,并从增殖角度研究TRAIL对白血病细胞诱导凋亡不敏感的机制。实验方法:收集对数生长期的白血病细胞株:Jurkat,NB4,K562。应用MTT法测TRAIL对细胞增殖抑制情况,确定最佳药物浓度及作用时间;流式细胞仪检测TRAIL作用后细胞周期变化;Western检测PI3K信号转导通路蛋白Akt-1和p-Akt-1的变化;应用PI/annexinⅤ法检测提前用PI3K抑制剂LY294002处理后TRAIL诱导白血病细胞凋亡率的变化。实验结果:TRAIL对白血病细胞增殖抑制率低,诱导凋亡不敏感; TRAIL对细胞周期无明显影响;信号转导通路蛋白p-Akt-1量增加;用PI3K抑制剂LY294002处理后白血病细胞对TRAIL诱导凋亡作用敏感性增加。实验结论:白血病细胞对TRAIL诱导凋亡不敏感,TRAIL诱导凋亡不敏感的机制可能与激活细胞PI3K-AKT增殖通路有关。