兔支气管败血波氏杆菌病是由支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)引起的一种家兔呼吸道传染病,常呈地方性流行,多为慢性,急性败血性死亡较少。该病病程长,反复发生,难治愈,给养兔业带来了严重的的经济损失。Bb的菌毛蛋白兼具毒力因子及免疫原的特性,其免疫原性已被证实。对fimN基因进行克隆表达和免疫原性分析,以重组蛋白为检测抗原建立间接ELISA诊断方法,为兔波氏杆菌临床快速检测和研制高效疫苗奠定良好的基础。本研究一共分为四部分内容,第一部分采用PCR技术扩增并克隆兔支气管败血波氏杆菌的fimN基因；第二部分以大肠杆菌原核pET-28a(+)为表达系统进行fimN基因的表达、纯化及表达蛋白免疫原性分析；第三部分是兔支气管败血波氏杆菌PCR检测方法的建立；第四部分是兔支气管败血波氏杆菌间接ELISA诊断方法的建立。根据兔支气管败血波氏杆菌菌毛蛋白的fimN基因序列,设计一对特异性引物,扩增出648bp的目的基因片段,将产物与pMD-19T载体连接,阳性质粒经双酶切和测序鉴定,结果表明,扩增的fimN基因与参考序列同源性可高达99%,成功构建了克隆载体。对pMD19T-fimN以及表达载体pET-28a(+)双酶切,连接转化后,获得重组质粒pETBb-fimN,双酶切和序列鉴定结果表明目的基因的插入位置和方向正确,加入IPTG诱导后经SDS-PAGE检测得到的目的蛋白大小约为27KD, Western blot检测结果显示,表达的蛋白能与Bb全菌阳性血清发生特异性结合,为后续的以重组fimN蛋白为包被抗原来建立间接ELISA快速诊断方法奠定基础。根据GenBank中支气管败血波氏杆菌fimN基因的短片段序列设计了一对特反应,且检出最低浓度为10pg,说明该方法敏感性高,特异性强,可用于临床检测。以表达并纯化的fimN蛋白为包被抗原,用fimN蛋白免疫实验兔制备血清作为阳性血清。优化反应条件,确定抗原和血清的最佳工作浓度,最佳封闭液、酶标二抗和血清的最佳作用时间,得出了阴性血清临界值为0.267,敏感性和特异性试验表明,该方法特异性强,敏感性高,用建立的间接ELISA方法检测随机采集的50份兔血清,结果显示阳性率为58%。该方法的建立为Bb血清学检测提供了新途径。