苗药观音草药效学及其化学成分的研究

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目的:本研究通过对苗药观音草(Reineckia carnea (Andr.) kunth)提取物作用于咳痰、哮喘、发热动物模型,研究观音草水、醇提取物及醇提物不同极性部位止咳、化痰、平喘及解热作用,初步探讨其对止咳平喘作用的机制,通过对观音草化学成分进行分析,通过对观音草开展系统研究,为其临床应用及制剂研发提供基础数据。  方法:通过小鼠氨水引咳法、豚鼠辣椒素引咳法观察观音草提取物及醇提物不同极性部位的止咳作用,采用酶联免疫吸附测定小鼠血清、BALF液中P物质浓度;通过观察小鼠气管酚红排泌量探究观音草提取物及醇提物不同极性部位的化痰作用;通过豚鼠磷酸组胺和氯化乙酰胆碱(His-Ach)混合液引喘法观察观音草提取物及醇提物不同极性部位的平喘作用,采用ELISA法检测BALF液中IgE、INF-γ、NO、IL-4、IL-5、IL-13浓度以及肺脏指数、脾脏指数和胸腺指数;通过酵母、LPS致热大鼠观察观音草提取物的解热作用,采用ELISA法检测血清中cAMP浓度;通过使用GC-MS分析鉴定观音草干品和鲜品全株、根部及叶部挥发性化学成分;通过基于UPLC-Q/TOF-MS分析观音草干品醇提物石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水部位化学成分。  结果:  (1)观音草提取物对化学刺激引起的小鼠咳嗽有明显的抑制作用;可增加小鼠气管酚红排泌量,增强呼吸道的分泌功能;能较好抑制由His-Ach等体积混合液所致豚鼠的哮喘反应;能显著降低酵母、脂多糖致大鼠发热体温,抑制血清cAMP浓度,具有良好的止咳化痰平喘及解热作用。其中,观音草75%醇提物的止咳化痰平喘药效与水提物对比效果较好。  (2)观音草75%醇提物石油醚、乙酸乙酯、正丁醇三个极性部位中,乙酸乙酯部位和正丁醇部位能不同程度的减少辣椒素致豚鼠咳嗽的咳嗽次数,延长咳嗽潜伏期,能够不同程度的显著降低血清和肺泡灌洗液种P物质浓度,提示其止咳作用可能与抑制咳嗽C纤维受体释放P物质有关;乙酸乙酯部位和正丁醇部位可以通过增加器官酚红排泌量,使得气管黏液的黏度降低,起到化痰的作用;正丁醇部位能显著地延长由His-Ach等体积混合液雾化致豚鼠哮喘的哮喘潜伏期,抑制哮喘模型激发阶段动物体重的下降,同时显著降低IgE、NO、IL-4浓度,显著升高INF-γ浓度,提示观音草醇提物正丁醇部位可能通过调节IgE、NO、IL-4、INF-γ的产生和释放,抑制炎症因子达到平喘作用,对肺泡灌洗液IL-5、IL-13浓度无显著性影响,对豚鼠肺脏指数、脾脏指数、胸腺指数均无显著性影响。  (3)通过GC-MS分析,从观音草中鉴定出挥发性化学成分干品共55种,鲜品共50种,其中观音草挥发性成分主要为烃类、醇类、酮类及含氧杂环类化合物;通过UPLC-Q/TOF-MS分析,初步推断观音草提取物中143种化合物,其中含有大量皂苷类、黄酮类化合物及氨基酸。  结论:观音草提取物具有良好的止咳、化痰、平喘作用,具有较好的解热作用,且醇提物的药效较水提物理想。观音草止咳作用机制可能是通过减少C纤维P物质的释放;通过增加小鼠气管酚红排泌量,使得呼吸道分泌功能增强,气管黏液的黏度降低达到化痰作用;通过调节IgE、NO、IL-4、INF-γ的产生和释放,抑制炎症因子达到平喘作用;通过有效抑制血清cAMP浓度,降低体温达到解热的作用。
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