邻苯二甲酸酯类(PAEs)作为重要的环境激素之一,主要用作增塑剂添加到聚氯乙烯产品中,可以增强塑料的弹性、韧性、透明度和耐用性。2011年的台湾塑化剂事件引起了人们对邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)强烈的关注。DEHP是最常用的邻苯二甲酸酯类增塑剂,它的毒性强,对生物体的健康(尤其是生殖健康)会产生严重危害。　　目前对于邻苯二甲酸酯的检测分析常用气相色谱和液相色谱法。这类方法对于邻苯二甲酸酯的检测分析已经比较纯熟,但是色谱技术需要对样品进行预处理,过程复杂,操作费时,而且分析成本相对昂贵。免疫分析技术特异性好,灵敏度高,操作简便,检测限低,不用对样品进行复杂的预处理。对于DEHP免疫分析报道目前还很少。本文研究的目标是建立测定DEHP的简单、快速、灵敏的免疫分析方法。本论文的工作主要有如下几个方面:　　1.DEHP多克隆抗体的制备　　用重氮化法将BSA载体连接到半抗原4-氨基邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHAP)上得到了免疫全抗原 DEHAP-BSA,然后用免疫抗原免疫大白兔,3个月后,采集血样,得到了DEHP的多克隆抗体,测得抗体终点效价为1:64,000,结果令人满意,并用饱和硫酸铵法纯化抗血清得到纯化抗体浓度为40 mg/mL。　　2.间接竞争酶联免疫法测定DEHP　　首先优化了ELIS A的实验条件,如包被抗原和DEHP抗体的浓度,反应时间,封闭液浓度,稀释液的pH值和浓度,酶标二抗浓度,以及标准液溶剂的选择。在最优实验条件下,采用制备的抗 DEHP多克隆抗体建立了间接竞争酶联免疫分析DEHP的方法。绘制了标准曲线,线性拟合后,得到方程式为A=0.778-0.0523lgC(A为吸光值, C为DEHP的浓度,单位为ng/mL),相关系数R2为0.984,线性范围为0.01-1,000 n g/m L,检测限为0.01 ng/m L。通过对实际水样的测定,计算出样品回收率为86.0％-113.0%。　　3.直接竞争荧光免疫法检测DEHP　　首先将FITC和DEHP抗体结合,制备了荧光标记抗体。然后优化了荧光免疫反应的各种条件,在最优条件下,建立了直接竞争荧光免疫分析 DEHP的方法。绘制了标准曲线,线性拟合后,方程式为F=7287-675lgC(F为荧光值,C为DEHP浓度,ng/mL),相关系数R2为0.988,线性范围为0.1-1000 ng/mL,检测限为0.05 ng/mL。通过对食品包装样品的测定,计算出样品回收率为81.0%-115.1%。