脂多糖结合蛋白(Lipopolysaccharide binding protein,LBP)，是机体在创伤、烧伤和Gˉ(Gram-negative)菌感染等多种损伤因素作用下，主要由肝细胞产生的一种介导内毒素与靶细胞受体结合的应激反应蛋白。LBP能显著促进脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)与单核/巨噬细胞膜表面的CD14 （mCD14）结合，形成LPS-LBP-mCD14复合物，经TLR4-MD-2-MYD88和NF-Kappa B途径，激活单核/巨噬细胞，促进炎症的发生、发展。研究表明LBP在内毒素介导的炎症反应过程中可能发挥着重要的促进和催化作用，进而导致肝、肺、肾等重要脏器产生严重损害。烧伤合并内毒素血症是常见的临床病症，易发生全身炎症反应综合症（systemic inflammatory response syndrome, SIRS）和多器官功能障碍综合症（multiple organs dysfunction syndrome, MODS），死亡率很高。LBP在其发生、发展过程中究竟具有什么作用，是否促进和催化过度炎症反应的发生，目前尚不清楚。因此研究LBP在烧伤合并内毒素血症损伤早期的生物学作用，并探索抑制LBP生物学作用的途径，对于防治烧伤合并内毒素血症具有重要的理论意义和临床应用前景。本课题旨在通过复制烧伤合并内毒素血症损伤家兔模型，分离、纯化LBP，并研究LBP的生物学功能，探讨LBP在炎症反应中的介导作用，另一方面，以昆虫细胞表达人源氨基末端脂多糖结合蛋白（NH-LBP）,并以此为抗原制备单克隆抗体，探讨抑制LBP生物学作用的途径和措施。本研究的主要结果和结论如下：1. 采用20%体表Ⅲ度烧伤合并腹腔注射LPS（0.5mg/kg体重），复制烧伤合并内毒素血症致多器官损害兔模型，致伤后6h，其外周血TNFα和ALT显著升高；光镜下见肝细胞局灶性坏死、肺支气管上皮坏死脱落、肺泡壁充血及渗出等一系列病理改变。2. 通过Bio-Rex 70 Resin、Mono-Q二步离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤方法成功地从烧伤合并内毒素血症损伤兔血清中分离、纯化LBP，其分子量约60kDα，蛋白质氨基末端残基序列为TNPGLITRIT。经流式细胞分析实验、绵羊红细胞凝集实验、ELISA实验证明LBP能显著促进LPS与单核/巨噬细胞结合，其结合率为空白对照的8.55倍。在活性实验中，LBP能使U937单核细胞在极低的LPS的作用下（0.5ng/ml）分泌TNFα，证明在烧伤合并内毒素血症损伤早期就有LBP参与介导炎症反应，并且在肝、肺等主要脏器的损害过程中可能发挥重要作用。3. 在分离、纯化LBP的基础上，从烧伤合并内毒素血症损伤兔血清中获得一种未<WP=8>知蛋白质，其分子量约48kDα，蛋白质氨基末端残基序列为GSQGTFTSEE，通过互联网检测未见相同的氨基酸序列。经流式细胞分析实验、绵羊红细胞凝聚实验、ELISA实验证明此种蛋白质也能显著促进LPS与单核/巨噬细胞结合，其结合率为空白对照的8.07倍。通过活性实验，证明它也能使U937单核细胞在极低的LPS的作用下（0.5ng/ml）分泌TNFα，其活性与LBP相差不显著（P>0.05）,提示此种蛋白质具有与LBP相近似的生物学作用，表明此种蛋白质可能为一种新型脂多糖结合蛋白，命名为P48。4. 通过昆虫sf9和sf21细胞扩增编码人NH-LBP的杆状病毒，并以sf21表达、分泌NH-LBP，再用TALON柱芯亲和纯化，成功获得约8mg NH-LBP。在实验中发现sf9细胞扩增病毒的能力强于sf21细胞，但只有sf21细胞能表达和分泌NH-LBP。5. 以NH-LBP为抗原，以人源噬菌体抗体库（pComb3H, Fab）进行8轮筛选，在筛选过程中抗体效价得以提高。通过切除gene Ⅲ，使得抗体成为可溶性，以NH-LBP为抗原包酶联板，经ELISA法鉴定，获得3株编码与NH-LBP高结合力的单克隆抗体菌株。扩增单克隆抗体菌株细菌并抽提其质粒，经扩增轻、重链后进行鉴定。