链霉菌ZX01发酵液中抗烟草花叶病毒(TMV)活性成分研究

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植物病毒病在农业生产上发生普遍、防治困难,因此往往对农作物产量造成重大损失。微生物是抗植物病毒制剂开发的重要资源宝库,从微生物中筛选具有抗植物病毒活性的代谢产物是目前研制植物病毒抑制剂的重要途径之一。链霉菌ZX01(Streptomyces.sp)是西北农林科技大学无公害农药研究服务中心从新疆喀纳斯湖湿地土壤中分离出的一种放线菌。实验室前期的研究表明,ZX01菌株发酵液对TMV具有明显的抑制活性。为确定ZX01菌株发酵液中抗TMV活性成分组成,本研究以TMV-烟草为测试对象,以活性追踪法为基础,综合运用大孔吸附树脂、正相硅胶、反相硅胶、葡聚糖凝胶LH-20等分离材料,对链霉菌ZX01发酵液中抗TMV活性成分进行了初步的研究,取得的主要结果如下:1.利用大孔吸附树脂柱层析,除去链霉菌ZX01发酵液中的无机盐和不易被吸附的小分子物质,对抗TMV活性物质进行富集并测定了各洗脱组分的抗TMV钝化活性。其中15%甲醇、30%甲醇、50%甲醇洗脱馏分在5mg/mL浓度下,对TMV体外钝化活性分别为96.09%、99.91%、96.27%,表现出强烈的体外钝化作用。2从发酵液50%甲醇洗脱段乙酸乙酯萃取相中分离得到4个化合物,并对其进行了结构鉴定,分别为焦粘酸,1,3-丁二醇,2,3丁二醇,乙酸钠。3.对发酵液30%甲醇洗脱组分,采用活性追踪的方法,通过硅胶、反相硅胶、葡聚糖凝胶LH-20多次柱层析分离得到丙氨酸,异亮氨酸,亮氨酸,焦谷氨酸甲酯和一个较纯组分C。对组分C结合薄层层析、级联质谱、核磁共振等定性分析手段,初步确定组分C中主要化合物之一含有肽链结构(Leu/Ile-Leu/Ile-Leu/Ile-Leu/Ile)—,分子量为814。链霉菌ZX01菌株发酵液中,活性化合物极性较大,成分复杂,确定其活性化合物的结构,有待进一步研究。
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