硫辛酸通过Nrf2-ARE信号通路对百草枯中毒致大鼠急性肺损伤保护作用研究

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目的:研究硫辛酸对百草枯中毒致大鼠急性肺损伤抗氧化相关转录因子核因子相关因子2(Nuclearfactor-erythroid2-relatedfactor,Nrf-2)和亚铁血红素氧化酶1(Hemeoxygenase1,HO-1)表达的影响,探讨硫辛酸保护百草枯肺的作用机制。  方法:SPF级健康成年雄性Sprage-Dawley大鼠,共72只。随机分为正常对照组(CONTROL组12只)、百草枯中毒组(paraquat,PQ组30只)和百草枯中毒+硫辛酸干预组(paraquat+LA,LA组30只),CONTROL组分为6h和72h亚组,PQ组和LA组动物按观察时点6h、12h、24h、48h、72h随机分成五个亚组(每个亚组各6只)。CONTROL组给以等量的生理盐水腹腔注射;PQ组以百草枯25mg/kg一次性腹腔注射染毒造模,LA组在给予百草枯25mg/kg一次性腹腔注射染毒半小时后尾静脉给予LA100mg/kg,24h,48h,72h亚组分别于每日同一时间点尾静脉给予LA100mg/kg,直至处死时为止。每日称量大鼠体重,分别在相应时间点处死后取大鼠肺组织,测量其肺系数,取大鼠左肺组织相同部位进行HE染色及免疫组织化学检测;取右肺相同部位组织检测GSH-Px、SOD活力;提取右肺组织中总RNA,用RT-PCR法测Nrf-2,HO-1水平。  结果:①体重与肺系数:PQ组和LA组体重和肺系数均较CONTROL组降低,12h,24h,48h,72h点均有显著统计学差异(P<0.01),LA组在48h和72h点体重降低明显少于PQ组(P<0.01,P<0.05)肺系数LA组在24h,48h,72h点明显低于PQ组(P<0.01,P<0.05);②肺部病理组织学:CONTROL组表现为正常肺部病理组织结构,PQ组和LA组肺部病理损伤程度均较CONTROL组严重,但在各个时间点,LA组损伤程度轻于PQ组;③GSH-Px,SOD活性检测:GSH-Px活性PQ组和LA组明显低于CONTROL组,在12h,24h,48h,72h四个时间点有显著统计学差异(P<0.01),LA组在24,48,72h高于PQ组(P<0.01,P<0.05);SOD活性PQ组和LA组明显低于CONTROL组,各个时间点比较均有显著性差异(P<0.01),而LA组各个时间点明显高于PQ组(P<0.01);④免疫组织化学半定量分析Nrf-2,HO-1:Nrf-2阳性系数PQ组和LA组明显高于CONTROL组,各个时间点比较均有显著性差异(P<0.01),LA组在48h,72h点高于PQ组(P<0.01,P<0.05);HO-1阳性系数PQ组在72h点明显高于CONTROL组(P<0.01),LA组在72h点明显高于PQ组(P<0.05),而其他几个时间点比较无统计学意义(P>0.05);⑤Nrf-2,HO-1mRNA表达:NRF-2mRNA表达PQ组和LA组在各个时间点比较均高于CONTROL组(P<0.01),而LA组在12h,24h,48h,72h四个时间点NRF-2表达较PQ组明显增加(P<0.01,P<0.05)。HO-1mRNA表达PQ组和LA组高于CONTROL组,在各个时间点比较均有显著统计学差异(P<0.01),而LA组在48h,72h点表达较PQ组明显增加(P<0.01,P<0.05)。  结论:硫辛酸可能通过NRF2-ARE通路保护百草枯中毒致大鼠急性肺损伤。
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