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1 Southern—blotting证明IFN-THY已插入Bm-BacPAK6中(4kb左右的杂交带)；将重组病毒Bm-BacPAK-IFN-THY感染家蚕细胞，5龄家蚕幼虫和蚕蛹进行表达。SDS-PAGE、Western-blotting证明IFN-THY在家蚕细胞，家蚕幼虫和蚕蛹中均得到了表达(分子量为23kD左右)，而且表达产物具有IFN蛋白的免疫原性；微量细胞病变抑制法显示细胞表达产物中96小时表达样品IFN活性为3.72×10~4IU／ml，120小时表达样品IFN活性为3.10×10~5IU／ml，而24-72小时表达样品活性较低；蚕血淋巴表达产物中144小时活性最高，达到3.81×10~6IU／ml；120小时活性次之，为1.53×10~5IU／ml；96小时生物活性为2.44×10~4IU／ml；而24—72小时活性较低；蚕蛹表达产物中120小时活性最高，达到6.10×10~5IU／ml：96小时活性次之，为4.57×10~4IU／ml；24—72小时活性较低。玫瑰花结法显示细胞表达产物中与对照组相比，表达样品提高了玫瑰花结形成率，48—120小时表达产物的玫瑰花结形成率均在10％以上；蚕血淋巴表达产物中与对照组相比，表达样品提高了玫瑰花结形成率，48—144小时表达产物的玫瑰花结形成率均在10％以上；蚕蛹表达产物中与对照组相比，表达样品提高了玫瑰花结形成率，48—120小时表达产物的玫瑰花结形成率均在12％以上。结果表明融合基因在家蚕细胞，家蚕幼虫和蚕蛹中均得到了高效表达，表达的融合蛋白具有IFN-α2b和THY-α1的双重生物活性。小鼠口服试验表明，高剂量组口服15分钟后在小鼠血清内可检测到IFN活性，15分钟以后IFN活性逐渐降低；低剂量组在小鼠血清中IFN活性较低。家蚕生物反应器高效表达人干扰素Q一胸腺肤。1融合基因、干扰素p与干扰素p突 变体基因及其产物生物活性的初步研究 2用基因重组技术和PCR定点突变技术构建了人干扰素p及其突变基因，克隆到pBaepAKS上，获得重组转移载体pBaepAK一IFNp和pBa。PAK一IFN日517。与线形化Bm一BacPAK6病毒基因组DNA共转染家蚕细胞，经过体内重组，筛选到重组病毒Bm一BaePAK一IFN日和Bm一BaePAK一IFN p 517。将Bm一BaePAK一IFNp和Bm一BacPAK一工FN p 517分别感染家蚕细胞和家蚕幼虫进行表达。Southern一blotting证明IFN日和IFN旦517均已插入B介BaePAK6中(3.gkb左右的杂交带);SDS一PAGE、Western一blotting证明IFNp和IFN日517均在家蚕细胞和家蚕幼虫中得到了表达(分子量为ZOkD左右)，且具有IFN蛋白的免疫原性;微量细胞病变抑制法显示，1):IFNp细胞表达产物中120小时表达样品IFN活性最高，为1.03xl0‘IU/ml，144小时表达样品IFN活性为8.76XIO3IU/ml，96小时表达样品工FN活性为1.35xl护工U/ml，而24一72小时表达样品活性较低;蚕血表达产物中144小时活性最高，达到3.97 xl了IU/m1:120小时活性次之，为3.ssxlo5lu/ml:96小时生物活性为5.43xlo4lu/mI;24一72小时活性较低。2):IFN日517细胞表达产物中96小时表达样品IFN活性为1.08XIO3IU/ml，120小时表达样PaP IFN活性为2.62汉10‘IU/ml，144小时表达样品IFN活性为6.55x 103IU/ml，24一72小时表达样品活性较低。蚕血表达产物中144小时活性最高，达到4.32 x 106 Iu/ml;一20小时活性次之，为l.ssxlo5lu/mz;96小时生物活性为5.73 xl护形/ml:而24一72小时活性较低。结果表明两种基因在家蚕细胞，家蚕幼虫中均得到了高效表达，表达的蛋白均具有IFN的生物活性。