论文部分内容阅读
输卵管积水对子宫内膜容受性影响的研究目的:研究输卵管积水对IVF-ET结局的影响;探讨输卵管积水对窗口期子宫内膜组织基因表达谱的改变,筛选出输卵管积水影响子宫内膜容受性的差异基因;并对其中的差异表达基因在子宫内膜的mRNA及蛋白表达水平进行验证,探讨其临床意义。方法:1.统计分析:2003年8月～2005年8月输卵管积水行IVF-ET 143个周期(积水组)及输卵管其它病变无积水行IVF-ET 263个周期(阻塞组),比较两组IVF-ET结局的差异。2.寡核苷酸芯片技术:取输卵管积水、输卵管阻塞不伴积水和正常女性窗口期子宫内膜组织,分别提取组织总RNA、逆转录成cDNA、生物素标记合成cRNA探针,与Affymetrix U133A2.0基因表达谱芯片杂交,用Affymetrix公司的GCOS1.2软件进行数据分析,以SignalLog Ratio≧2或≦-2的数据点为显著性差异表达基因的筛选标准,通过网上数据库查询基因的功能,进行差异表达基因功能分类。3.real-time PCR实验:从上述筛选出的差异表达基因谱中,选择有显著差异表达的骨桥蛋白(OPN)和GdA(又名胎盘蛋白14,PP14)以及与OPN相互结合构成胚胎粘附的整合素β3作为研究指标。采用real-time PCR方法对31例输卵管积水、29例输卵管阻塞不伴积水以及21例正常对照患者窗口期子宫内膜组织中上述三种基因表达量进行验证。4.免疫组织化学实验:对各组患者子宫内膜中骨桥蛋白(OPN)、整合素β3和GdA相应蛋白表达变化进行免疫组织化学分析验证。SPSS13.0统计软件包进行分析。P＜0.05作为检验水准。结果:1.IVF-ET治疗结局在移植同等质量的胚胎后,输卵管积水组的临床妊娠率32.87%、胚胎着床率18.61%,早期流产率19.15%、异位妊娠率17.02%;输卵管阻塞组临床妊娠率49.8%、胚胎着床率31.87%,早期流产率6.87%、异位妊娠率4.58%。2.DNA微阵列(1)差异表达基因积水组比正常组、阻塞组比正常组、积水组比阻塞组,分别筛选出显著差异表达基因588条、180条和750条,按基因主要功能可分为:酶、细胞粘附分子、细胞骨架蛋白相关基因、细胞周期调节因子、金属离子结合蛋白、信号转导蛋白相关基因、免疫反应相关蛋白、载体蛋白相关基因、功能未知的基因等。(2)积水组比正常组表达差异基因共有588条基因表达有差异,其中表达上调为351条,表达下调为237条。表达上调的和表达下调基因中均以酶活性相关基因最多、其次是信号转导蛋白基因。(3)阻塞组比正常组表达差异基因共有180条基因表达有差异,其中表达上调为106条,表达下调为74条。表达差异基因亦以酶活性相关基因最多、其次是信号转导蛋白基因。(4)积水组比阻塞组表达差异基因共有750条基因表达有差异,其中表达上调为302条,表达下调为448条。表达差异基因除外酶活性相关基因最多的是信号转导蛋白基因。3.Real-time PCR实验:(1)三组患者窗口期子宫内膜组织中OPN基因的表达差异积水组、阻塞组和对照组患者子宫内膜组织中OPN相对表达量依次为0.6238±0.2690、0.8955±0.3887、和1.1065±0.7821;三组间两两相比OPN均无明显差异。(2)三组患者窗口期子宫内膜组织中整合素β3基因的表达差异积水组、阻塞组和对照组患者子宫内膜组织中整合素β3相对表达量依次为0.1945±0.1024、0.8285±0.1945和1.2541±0.5245;积水组与阻塞组相比,积水组与对照组相比有明显差异。(3)三组患者窗口期子宫内膜组织中GdA基因的表达差异积水组、阻塞组和对照组患者子宫内膜组织中GdA相对表达量依次为2.0815±0.3425、3.1578±0.6712、和4.1257±0.9476;积水组与对照组相比、阻塞组与对照组相比有明显差异。4.免疫组织化学实验:(1)三组患者窗口期子宫内膜组织中OPN的表达差异OPN定位于子宫内膜腺上皮及腔上皮细胞,基质细胞中无表达或仅极少量表达。三组相比无显著性差异。(2)三组患者窗口期子宫内膜组织中整合素β3的表达差异整合素β3定位于子宫内膜腺上皮细胞和(或)腔上皮细胞,基质细胞仅极少量表达。大部分的输卵管积水患者的子宫内膜上整合素β3表达缺失或呈弱阳性。积水组的表达强度显著低于阻塞组及对照组。(3)三组患者窗口期子宫内膜组织中GdA的表达差异GdA定位于子宫内膜腺上皮及腔上皮细胞,基质细胞中无表达或仅极少量表达。积水组和阻塞组的表达强度较对照组都明显降低。结论:1.输卵管积水患者IVF-ET治疗的临床妊娠率低、早期流产率高;2.输卵管积水对窗口期子宫内膜多种基因的表达产生影响;其中表达差异最大的基因是酶活性相关基因和信号转导蛋白基因。3.输卵管积水和输卵管其他病变不影响窗口期子宫内膜OPN基因的表达、转录及其蛋白质的合成分泌;4.输卵管积水抑制窗口期子宫内膜上整合素β3基因表达、转录及其蛋白合成分泌,降低子宫内膜容受胚胎粘附、着床能力;5.输卵管积水降低窗口期子宫内膜上GdA基因表达、转录及其蛋白质合成分泌,破坏子宫内膜对胚胎的免疫耐受;