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目的:研究肺炎支原体对炎症因子TNF-a、TGF-β、IL-1β、IL-8水平的影响,以及QTF对炎症因子的下调作用,探索肺炎支原体通过Caspase-3/8、Fas/F asL通路诱导小鼠肺泡上皮细胞及肺微血管内皮细胞凋亡的机制以及QTF对肺炎支原体诱导小鼠肺泡上皮细胞及肺微血管内皮细胞凋亡的抑制保护作用。证实QTF在支原体肺炎中的治疗作用机制。方法:将72只4周龄,体重16±2g,SPF级,雌性Ba1b/c小鼠随机分为3组,每组24只:1)A组为正常对照组;2)B组为模型组;3)C组为QTF组。用0.5%戊巴比妥钠13uL/g麻醉各组动物后,正常组以50ul 0.9%生理盐水滴鼻,其余各组均以MP菌液50ul(含1× 107 CFU/ml)缓慢滴入鼻腔使其进入气管支气管,连续2天。感染第1天开始治疗。A、B组以生理盐水0.25ml/20g灌胃;C组以QTF0.25ml/20g灌胃,每日一次,连续治疗7天。实验第3天、第7天,分批处死小鼠,取材。光学显微镜下观察各组小鼠肺组织形态、气管及血管周围炎细胞浸润、肺泡壁增厚破坏、气道狭窄情况、血栓情况等。ELISA法,检测各组小鼠血清中TNF-a、TGF-β、IL-1β、IL-8水平。流式细胞术检测各组小鼠BALF中PMVEC、AT-Ⅱ细胞计数及分类。Real Time-PCR法、Western Blot法,检测各组小鼠Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-8,上游因子Apaf-1、细胞色素C及下游因子PARP、蛋白激酶C的表达差异。结果:(1)PCR法检测各组小鼠肺组织中MP DNA表达,结果显示实验第3天、实验第7天模型组与QTF组感染小鼠肺组织中均有MP DNA表达,表明MP感染小鼠造模成功。(2)病理观察结果显示对照组小鼠肺组织结构基本完好,支气管和肺泡未见明显病变,未见炎性细胞浸润;模型组小鼠肺组织支气管周围和肺间质可见大量炎症细胞浸润,肺泡壁毛细血管扩张充盈,肺泡壁增厚破坏,肺泡间隔增厚,细支气管壁增厚,支气管管腔变窄;QTF组小鼠肺组织中支气管周围和肺间质可见少量炎症细胞浸润,肺泡壁毛细血管轻度扩张充盈,较少部分肺泡壁增厚,支气管粘膜上皮水肿减轻,支气管管腔变窄不明显。(3)ELISA法检测各组小鼠血清中TNF-a、TGF-β、IL-1β、IL-8水平,与对照组比较,模型组小鼠血清中各因子水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,治疗组小鼠血清中各因子水平均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01);QTF干预3天与7天检测结果相比较,干预7天各组小鼠血清中各因子水平均低于干预3天的水平,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)流式细胞术检测各组小鼠BALF中PMVEC、AT-Ⅱ细胞计数及分类,与对照组比较,模型组小鼠BALF中细胞计数均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,治疗组小鼠BALF中细胞计数均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01);QTF干预3天与7天检测结果相比较,干预7天各组小鼠BALF中细胞计数均低于干预3天,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)Western-Blot 法检测细胞凋亡相关蛋白 Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-8,上游因子Apaf-1、细胞色素C及下游因子PARP、PKC表达水平,与对照组比较,模型组小鼠肺组织中各蛋白表达量均显著增加,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,治疗组小鼠肺组织中各蛋白表达量均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);QTF干预3天与7天检测结果相比较,干预7天各组小鼠肺组织中各蛋白表达量均低于干预3天的表达量,差异有统计学意义(P<0.05)。(6)RT-PCR 检测凋亡蛋白 Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-8,上游因子 Apaf-1、细胞色素C及下游因子PARP、PKC mRNA表达水平,与对照组比较,模型组小鼠肺组织中各蛋白基因表达量显著增加,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,治疗组小鼠肺组织中各蛋白基因表达量均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。QTF干预3天与7天检测结果相比较,干预7天各组小鼠肺组织中各蛋白基因表达量均低于干预3天,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)MP可引起小鼠血清中炎症因子(TNF-a、TGF-β、IL-1β、IL-8)的表达上调,QTF能够减轻MP感染引起的炎症水平;(2)MP可通过Caspase-3/8、Fas/FasL通路引起小鼠肺泡上皮细胞及肺微血管内皮细胞的凋亡,QTF能抑制MP感染引起的细胞凋亡;(3)QTF治疗7天后,其对炎症的下调及抑制细胞凋亡的作用均高于3天治疗组。