“老姑娘牌醒甘1号”对小鼠抗疲劳作用及抗急性酒精性肝损伤作用研究

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疲劳(Fatigue)是由于肌肉产生力量的能力下降或是神经活动减弱而引起的综合性生理现象。肌肉疲劳有两个主要原因:神经产生持续信号的能力(神经疲劳)受限,收缩肌纤维收缩能力(代谢疲劳)减退。酒精性肝病(Alcoholic liver disease,ALD)是一种复杂的全身多系统受累的疾病。酗酒是导致酒精性肝病(ALD)的全球发病率和死亡率升高的一个主要原因。在全球范围内,酒精性相关疾病的引起的负担不容小觑。人参、金银花、黄精、蒲公英均为中国传统中草药,尤以人参为珍贵,为国内外公认的药用保健良品。老姑娘牌醒甘1号以该四种成分为主辅以冰糖牛磺酸和复合维生素制成,具有天然、安全、无毒副作用等优点。目的:研究老姑娘牌醒甘1号饮料的抗疲劳及解酒护肝作用,并初步阐述其作用机制。方法:在研究老姑娘牌醒甘1号饮料抗疲劳活性试验中,28只小鼠被分别分成对照组(CG)、阳性对照组(PG)、饮料高剂量组(HDG)和低剂量组(LDG)四组,通过负重游泳实验进行抗疲劳测试,测定血清中肌酸激酶(CK)、乳酸(LD)、尿素氮(BUN)、血氨(PA)含量;检测肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化歧化酶(SOD),肝糖原(LG)水平和腓肠肌糖原(MG)水平。在研究老姑娘牌醒甘1号饮料对于急性酒精性肝损伤保护作用实验的研究中,将45只小鼠分为空白对照组(BG)、酒精模型对照组(AMG)、阳性对照组(MDG)、饮料高剂量组(HDG)和低剂量组(LDG),进行急性酒精肝损伤实验,利用翻正反射测试小鼠酒精耐受时间和清醒时间,通过试剂盒检测血清中碱性磷酸酶(AKP)、谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、总胆红素(TBIL)、甘油三酯(TG)水平,并检测肝组织中的丙二醛(MDA)、甘油三酯(TG)水平。在老姑娘牌醒甘1号饮料对于急性酒精性肝损伤保护作用实验的机制探究中,进一步研究其对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏组织中参与酒精代谢、炎症、纤维化、脂肪代谢及凋亡相关的基因如:通过Real-time PCR技术从基因分子水平ADH2、ALDH2、TGF-β1、β-catenin、PPAR-α基因mRNA表达,并通过Western Blot技术检测PPAR-α、AMPK、Akt蛋白表达的影响,进一步从分子水平探讨“老姑娘醒甘1号”对急性酒精性肝损伤保护的分子机制。结果:老姑娘牌醒甘1号饮料在抗疲劳试验中能够显著提升小鼠负重力竭游泳时间,其中阳性对照组和饮料高、低剂量组与对照组相比具有统计学意义(P<0.05),MG、LG和SOD水平明显增加,高剂量饮料组的LG和MG含量与对照组比较有显著升高(P<0.05),高、低剂量饮料两组的SOD含量均高于对照组,有统计学意义(P<0.05),血清中CK、LD、BUN、PA和肝脏中MDA水平明显降低,高低剂量饮料组与对照组相比均有统计学意义(P<0.05);在探究对于小鼠急性酒精性肝损伤影响的实验中,与酒精模型组相比,饮料组小鼠酒精耐受时间升高,由清醒到醉酒昏睡所需时间延长,从昏睡到清醒所需时间缩短,且均有统计学意义(P<0.05)。老姑娘牌醒甘1号高剂量和低剂量组小鼠血清中的AKP、GOT、GPT、TG、TBIL均较酒精模型组有显著降低,其水平与阳性药物组接近,且均有统计学意义(P<0.05)。高低剂量饮料组小鼠肝脏中TG和MDA的含量均较酒精模型组有显著降低,均有统计学意义(P<0.05)。在探究对于小鼠急性酒精性肝损伤保护作用机制的实验中,高、低剂量饮料组小鼠肝脏中ADH2、ALDH2、PPAR-α、AMPK、Akt的表达均较酒精模型组有显著上调,并可以下调TGF-β1及β-catenin的表达,且均有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)通过给予小鼠负重力竭游泳实验,根据记录游泳持续时间,服用老姑娘牌醒甘1号的高剂量和低剂量组的小鼠的游泳力竭时间延长,老姑娘牌醒甘1号有提高运动耐力的能力。(2)在血清中检测的CK、LD、BUN、PA四项指标中,老姑娘牌醒甘1号高低剂量组的小鼠与对照组相比均有显著差异,可能老姑娘牌醒甘1号有促进乳酸代谢减轻其累积的作用,说明长期服用老姑娘牌醒甘1号具有消除疲劳且提高机体运动耐力的作用。老姑娘牌醒甘1号饮品的高低剂量组均能显著降低小鼠血清中MDA的积累,并提高SOD的活性,减少氧化作用的损伤,抑制氧化应激,提高机体抗氧化能力,给予小鼠16ml/kg高剂量的老姑娘牌醒甘1号可显著提高肝糖原和肌糖原的储存。证明此款以人参等主成分的功能型饮品具有缓解疲劳,提高运动能力,增强人体消除疲劳能力的功效。(3)在本实验中,采用一次性大量施与53°白酒,建立的急性酒精性肝损伤模型,老姑娘牌醒甘1号高剂量和低剂量组血清中的AKP、GOT、GPT、TG、TBIL均较酒精模型组有显著降低,且水平与阳性药物组接近,同时服用老姑娘牌醒甘1号的小鼠肝脏中TG和MDA的含量均较酒精模型组有显著降低。以上结果说明长期服用老姑娘牌醒甘1号可以增强机体抗氧化能力,进而保护肝脏细胞,减少因为酒精造成的损伤,使其代谢脂肪的功能趋于正常水平。(4)与酒精模型组相比,被给予老姑娘牌醒甘1号高低剂量组的小鼠的酒精耐受时间明显高于酒精模型组,昏睡时间明显低于酒精模型组,且肝脏系数与酒精模型组对比显著降低。(5)在病理学分析中,由于酒精造模导致其肝索排列紊乱,肝细胞膨胀,细胞界限模糊,脂滴大量蓄积在肝细胞内。而给予老姑娘牌醒甘1号高剂量和低剂量的受试组并无明显肝细胞肿胀显现,证明本饮品有预防饮酒造成的肝组织炎症和脂肪堆积的作用。该病理切片反映的情况和该实验的各项指标的测定结果吻合,老姑娘牌醒甘1号明显的缓解了肝组织损伤的状态,对肝脏起到了良好的保护作用。(6)老姑娘牌醒甘1号对于小鼠急性酒精性肝损伤保护作用的初步机制是通过是通过上调ADH2及ALDH2促进乙醇代谢、上调AMPK缓解炎症状态、下调TGF-β1及β-catenin防止肝纤维化、上调PPAR-α表达以缓解因为酒精造成的脂质代谢功能障碍,进而起到改善由过量饮酒导致的肝脏乙醇代谢功能障碍、肝炎症、纤维化状态和脂质过氧化代谢障碍的作用。
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