【摘 要】
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雌性哺乳动物初情期是指雌性哺乳动物初次出现发情症状并排出卵子的时期,是性成熟的标志。初情期日龄的早晚直接关系到雌性哺乳动物繁殖性能的高低,初情期日龄越早,动物能较早进入生产。组蛋白H3上第二十七号赖氨酸的三甲基化（H3K27me3）修饰是表观遗传学中较为重要的一种抑制性翻译后修饰方式,参与众多的生殖生理过程。前人研究发现,H3K27me3可能通过影响卵泡的发育,进而影响雌性哺乳动物的初情启动。本研
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雌性哺乳动物初情期是指雌性哺乳动物初次出现发情症状并排出卵子的时期,是性成熟的标志。初情期日龄的早晚直接关系到雌性哺乳动物繁殖性能的高低,初情期日龄越早,动物能较早进入生产。组蛋白H3上第二十七号赖氨酸的三甲基化（H3K27me3）修饰是表观遗传学中较为重要的一种抑制性翻译后修饰方式,参与众多的生殖生理过程。前人研究发现,H3K27me3可能通过影响卵泡的发育,进而影响雌性哺乳动物的初情启动。本研究以C57BL/6J小鼠为动物模型,探讨H3K27me3对小鼠繁殖性状的影响,期望为解析H3K27me3调控哺乳动物的繁殖性状的机制提供基础。在实验中,每日对C57BL/6J小鼠进行阴道口查情并采集阴道脱落细胞,观察细胞变化,确定初情期日龄。然后分别以2,6,12,18,24,30 m M的激动剂和抑制剂连续注射小鼠3天,在注射后的48 h后,屠宰并收集卵巢组织,检测卵巢H3K27me3的表达情况。在第二次实验中,以6m M浓度连续注射药物3天,在注射后的24,48和96 h后,屠宰并收集卵巢组织,检测卵巢H3K27me3的表达情况。根据蛋白表达效果来确定注射浓度和时间。随后,把72只21日龄雌性小鼠随机平分成4组,第1组每天注射20μL生理盐水（Saline组）,第2组每天注射20μL 6 m M溶剂DMSO（DMSO组）,第3组每天注射20μL6 m M H3K27me3的抑制剂EPZ005687（EPZ005687组）,第4组每天注射20μL6 m M H3K27me3的激动剂GSK-J4（GSK-J4组）。每种试剂连续注射21天:（1）每天观察并记录小鼠的阴道口红肿情况及初情日龄;（2）在第7,14和21天每组屠宰并摘眼球采血,检测小鼠体内FSH、LH、Gn RH和E2等激素浓度的变化。（3）21天后,每组剩余的6只小鼠与成年公鼠自然交配,记录每只母鼠的1-7胎的生产数据,包括产总仔数、产活仔数和初生重等。本研究实验结果:（1）通过实验确认C57BL/6J小鼠的初情期日龄在5周龄,发情周期4～5天;（2）通过实验确认Saline组、DMSO组、EPZ005687组、GSK-J4组小鼠平均初情日龄分别为36.44、35.9、36.64、38.4日龄。其中,EPZ005687组小鼠的初情期日龄要早于DMSO组;激动剂GSK-J4组的小鼠最先启动初情期,但平均初情日龄为天显著晚于其他组（P＜0.05）。表明抑制体内H3K27me3可促进小鼠初情日龄,相反,促进H3K27me3可抑制初情日龄;（3）H3K27me3对小鼠激素的影响:上调H3K27me3可促进E2的分泌,但抑制FSH、LH和Gn RH的分泌,下调H3K27me3可抑制E2、FSH和LH的分泌,但促进Gn RH的分泌;（4）上调或抑制内源H3K27me3对小鼠的分娩胎次、胎间距、总仔数、活仔数与死胎数的影响差异不显著（P＞0.05）。综上所述,本实验确定使用6m M的GSK-J4和EPZ005687后的48h可显著上调和下调H3K27me3的表达;连续注射H3K27me3抑制剂下降卵巢H3K27me3可显著促进小鼠初情期的启动,反之,连续注射激动剂上调卵巢H3K27me3会抑制小鼠初情期的启动。其中的机理可能是下调H3K27me3可促进血清Gn RH的含量,从而促进小鼠初情期的启动。本研究结果为进一步揭示H3K27me3在初情期启动过程中的作用机制提供了理论依据,但其中的分子机制需要进一步的研究。
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