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如今,癌症的发病率愈来愈高,癌症的控制和治疗已成为全球人们关注的焦点。药物治疗在肿瘤治疗中具有重要的价值,研发出疗效好,特异性高,副作用小的抗肿瘤药物是药物治疗的重点。抗肿瘤肽具有治疗效果好,作用部位准确,毒副作用低,分子量低,易于修饰和合成等优点,已经被应用到肿瘤的治疗和研究中,对癌症的治疗和控制具有重要的意义。本课题组前期从南极芽孢杆菌N11-8的代谢产物中分离得到了一种具有抗肿瘤活性的多肽PBN11-8,PBN11-8对多种肿瘤细胞具有细胞毒性,能抑制人肝癌细胞BEL-7402的迁移和侵袭,具有发展成为新型海洋抗肿瘤药物的潜力。本课题以抗肿瘤多肽PBN11-8为研究对象,通过PCR克隆技术得到编码PBN11-8的基因,确定出PBN11-8的基因序列。氨基酸序列分析结果显示PBN11-8准确的分子量为19.04kDa,等电点为5.37。由序列对比结果可知,PBN11-8是一种金属蛋白酶,福林-酚法测得多肽的酶活力为1172U/m L(0.85mg/m L),EDTA可以影响其蛋白酶活性,反应温度为50℃和pH为10.0时酶活力最高。PBN11-8在40℃以下性质稳定,碱性条件下酶活力高,是一种碱性蛋白酶,pH为7.0-8.0时性质稳定,易于储存。Mn2+可以提高PBN11-8的酶活力,相反的Hg2+可以抑制蛋白酶活性。利用重组表达技术,本课题组通过高表达大肠杆菌原核表达体系得到了重组PBN11-8。MTT结果显示,重组多肽具有较强的抗肿瘤活性,对多种肿瘤细胞具有增殖抑制作用。重组PBN11-8对人肝癌细胞BEL-7402,人卵巢癌细胞NIH:OVCAR-3,人大细胞肺癌细胞NCI-H460,人神经胶质瘤细胞U251和人肾透明细胞腺癌细胞786-0的IC50值分别为2.56,2.74,2.97,3.88和4.31μg/m L。重组PBN11-8可以显著改变BEL-7402的细胞形态,加药组细胞逐渐变圆聚团,胞间间隙明显。结晶紫粘附实验表明,重组多肽可以降低细胞的贴壁生长能力,进而影响细胞存活率。重组多肽蛋白酶活力为847U/m L(0.73mg/m L),酶活受EDTA影响较大,EDTA浓度为0.5mM,1.0mM和2.0mM时,剩余蛋白酶活仅为原蛋白酶活力的48.5%,13.2%和9.7%。重组PBN11-8最适反应温度为40℃,最适反应pH为10.0,40℃以下和中性条件下性质稳定。与天然多肽类似,Mn2+可以提高重组多肽的蛋白酶活力,Hg2+抑制作用最强。研究PBN11-8的相关性质对其后续的研究和应用有重要的价值,PBN11-8重组表达技术的建立,可以解决天然PBN11-8产量低的问题,这项研究为PBN11-8的进一步发展奠定了基础。