沙门菌（Salmonella）是一类重要的食源性革兰氏阴性肠道病原菌,主要威胁3周龄以下的幼禽,感染后死亡率高,严重影响了养鸡业发展及公共卫生安全,给我国养鸡产业造成巨大的经济损失。化学环境杀菌剂虽有较好的杀菌效果,但其长期的残留会对人体的健康造成损伤。噬菌体属于细菌病毒,是细菌的天敌,宿主专一性高,在杀灭细菌的同时却不会对人体带来危害。噬菌体广泛存在于海洋以及陆地,在多种环境条件中都可发现它的存在,其环境适应性及其特性使得噬菌体具有作为环境杀菌生物制剂的开发潜力。噬菌体鸡尾酒制剂为多种具有不同功能的噬菌体的混合物,根据拓宽噬菌体的裂解谱、增强噬菌体的杀菌能力等目的人工合成。本研究应用丝裂霉素C（MMC）成功从沙门菌前噬菌体基因中诱导并纯化出了沙门菌噬菌体,并初步分析了其生物特性,噬菌体的生物特性决定其生存环境适应能力和侵袭宿主菌的能力等。单一噬菌体噬菌谱窄,在应用中受到诸多限制,为了克服这一劣势,本研究将新分离的噬菌体与试验室保存的从环境中分离的烈性噬菌体pSQC73混合配比,应用于体外沙门菌噬菌体制剂的研发。相关研究如下:1.沙门菌噬菌体的诱导与纯化通过MMC试剂法诱导不同血清型的沙门菌,成功诱导了 16株沙门菌噬菌体。将这16株沙门菌噬菌体用双层平板法分别进行三次纯化,得到15株可形成稳定噬菌斑形态的噬菌体,诱导率较高为31.91%。经过测定,其效价均达到108 pfu/ml以上,效价较高。经透射电镜观察噬菌体微观形态可发现诱导得到的噬菌体包括长尾噬菌体与短尾噬菌体。沙门菌噬菌体的成功诱导与纯化为后期沙门菌噬菌体体外环境杀菌制剂的研发提供了重要的生物材料。2.沙门菌噬菌体的生物特性分析本研究旨在探究沙门菌噬菌体在不同条件下的生物特性。首先,利用试验室保存的46株不同血清型的沙门菌确定16株沙门噬菌体的噬菌谱,发现pP14的裂解谱较广。随后,对pP14进行热稳定性试验、酸碱稳定性试验,发现其耐高温能力、耐酸碱能力较强:80℃加热1h时、缓冲液pH小于3或大于12时分别可将其完全灭活。灭菌剂灭活试验得出,噬菌体pSQC73和pP14对于灭菌剂较为敏感,50%的乙醇、25%的戊二醛分别可将两种噬菌体完全灭活,此特点有利于养殖中的环境清洁工作。同时,对长尾pP14和一株短尾pG8进行了六个月的效价测定,对烈性噬菌体pSQC73测定了两年后的效价,发现三种噬菌体的效价均在数量级上保持稳定,证明噬菌体4℃保存效果较好,效价不易衰减。此外,根据抑菌试验可知,噬菌体pP14和pSQC73的抑菌时长可达6h左右。由以上特性分析可推测,两种噬菌体的性质较为稳定,环境对其影响较小,具备制备环境杀菌剂的潜力。3.沙门菌噬菌体鸡尾酒制剂的体外应用及效果评价本试验旨在探究沙门菌噬菌体鸡尾酒制剂的体外杀菌效果,弥补单一噬菌体宿主谱的局限性。本试验表明沙门菌噬菌体pP14和pSQC73的混合制剂在一定时间内有杀灭鼠伤寒沙门菌和鸡白痢沙门菌的效果,鸡尾酒制剂在1 h内可杀灭90%以上的细菌,高效杀菌效果可持续3h,持续杀菌可达6h,试验表明细菌浓度越低抑菌效果越好。结果表明该混合制剂对畜禽养殖环境中常见的沙门菌血清型杀灭效果好,维持时间长且易于去除,具有持续抑菌的特性,有潜力开发成为可用于生产使用的环境消毒剂。