水芹黄酮类成分分离鉴定和生物活性研究

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水芹(Oenanthe javanica)广泛分布于我国各地区,是传统的特色水生蔬菜,在中药学上用于治疗肝脏疾病。大量研究表明水芹具有保护肝脏,抗心律不齐,抗过敏和抗菌等功效。研究水芹的具体功能成分及其活性对它的开发利用提供理论支持,也能阐释它的抗氧化,抗癌等机制的机理。(1)以水芹叶为原料,使用水浴加热回流法进行提取,用响应面法设计了四因素三水平的实验方案,并经过分析和优化确定水芹叶黄酮的最佳提取工艺条件为料液比1:25、乙醇浓度70%、加热时间2.5h、温度73.8℃时,实验得到黄酮提取量为31.5mg/g DW(与预测值32.0mg/g DW接近),使用相同条件对茎提取得到黄酮提取量为6.21mg/gDW。(2)通过比较六种大孔吸附树脂对水芹粗黄酮提取物静态吸附性能,筛选出对水芹黄酮的静态吸附率为71.37%,解吸率为76.57%的大孔吸附树脂AB-8,并考察了动态吸附条件中的上样流速、洗脱溶剂浓度和体积及洗脱速率。结果表明动态吸附优化条件为:上样流速1mL/min,采用4BV80%乙醇以1.5mL/min流速洗脱,水芹粗提物纯度由7.1%提高到58.63%,树脂富集倍数7.6。以HPLC测定的总黄酮含量为指标计算纯化前后水芹粗提物纯度分别为6.44%和55.65%,树脂富集倍数为8.65,其中芦丁的富集倍数达到10倍。(3)对水芹黄酮进行提取并用AB-8大孔树脂进行纯化后使用高速逆流色谱法进行分离。采用溶剂体系乙酸乙酯-乙醇-水(体积比5:1:5)分离得到29.6mg纯度为97.6%的芦丁单体和5.2mg纯度97.1%的山奈酚-3-O-芸香糖苷。采用溶剂体系正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比5:7:5:5)在同样条件下分离得到7.1mg纯度为93.4%的槲皮素。(4)研究水芹总黄酮提取物冻干粉和水芹中分离纯化出的三种黄酮成分的抗氧化作用,采用DPPH去,ABTS去,FRAP法,ORAC法等体外抗氧化活性评价方法。用TEAC(Trolox equivalent antioxidant capability)值表示各成分抗氧化能力为:芦丁4.46±0.35gTE/g,山奈酚-3-O-芸香糖苷1.25±0.35gTE/g,槲皮素4.96±0.39g TE/g,水芹总黄酮提取物冻干粉1.52±0.32gTE/g.
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