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目的:胃癌是中国主要的恶性肿瘤之一,高增殖性、淋巴结和远处转移是胃癌患者预后差的主要原因,但其机制尚未明确。CDK5是体内重要的丝/苏氨酸激酶,参与多种神经退行性疾病的发生发展,其功能与其细胞定位密切相关。近年研究表明CDK5参与调控多种恶性肿瘤细胞增殖、侵袭与转移,但CDK5在胃癌发生发展中的作用机制尚未阐明。本研究旨在通过检测CDK5在胃癌组织中的表达情况,明确其临床意义;通过体外细胞实验明确不同核质定位的CDK5对胃癌细胞增殖、克隆形成及转移能力的影响;最后,通过免疫共沉淀实验结合蛋白质谱技术扫描CDK5的结合蛋白,探讨CDK5潜在的下游靶点及作用机制。本研究将从CDK5核质定位变化调控胃癌细胞增殖与转移这个新视点为揭示胃癌增殖与侵袭的机制奠定基础,为胃癌治疗提供新的候选靶点和干预手段。方法:1.采用免疫组织化学染色法检测244例胃癌组织中CDK5的表达情况,采用χ2检验、Kaplan-Meier法和Cox风险比例回归模型分析其与临床病理资料及患者预后的关系;2.构建不同核质定位的CDK5慢病毒质粒和CDK5敲弱慢病毒质粒,构建相应的稳转细胞系;3.采用CCK8和SRB法检测胃癌细胞的增殖能力,平板克隆形成实验检测胃癌细胞的克隆形成能力;侵袭小室实验检测胃癌细胞的转移能力;4.采用免疫共沉淀实验、蛋白质谱扫描技术等寻找CDK5的结合蛋白及潜在下游靶点。结果:1.CDK5在胃癌组织中93例(38.11%)呈低表达,151例(61.89%)呈高表达。低表达的患者预后差,CDK5高表达组患者的3年生存率(62.7%VS 50.5%)和5年生存率(52.7%VS 40.6%)均较低表达组的患者高,CDK5高表达患者的平均生存时间为75个月,低表达患者的平均生存时间为40个月(P<0.05),多因素分析结果提示CDK5的表达是判断患者预后的独立危险因素;2.CDK5-WT和CDK5-NLS过表达后可以明显抑制胃癌细胞的增殖、克隆形成和转移能力,但CDK5-NES过表达后仅能抑制胃癌细胞的转移能力,对增殖和克隆形成能力无明显影响;敲弱内源性CDK5后仅能促进胃癌细胞的转移能力,对增殖和克隆形成能力无明显影响;3.通过免疫共沉淀及蛋白质谱扫描,对比筛选出与不同核质定位的CDK5均能结合的蛋白有7个。4.CDK5能与PP2A结合,PP2A抑制剂冈田酸处理可以拮抗CDK5过表达抑制胃癌细胞转移的作用,但对CDK5入核引起的增殖和克隆形成能力的抑制无显著影响。结论:1.CDK5低表达患者预后差,CDK5的表达量可以作为预测患者预后的独立指标;2.内源性CDK5可以调控胃癌细胞的转移能力,但对增殖与克隆形成能力无明显影响;3.CDK5可能通过结合并调控PP2A影响胃癌细胞的转移。