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研究背景:周围神经损伤的修复是临床上的难题,目前修复手段依然以自体神经移植为标准手术,但由于自体神经来源有限且造成供区较多的并发症,故多年来医学界不断寻找能够替代自体神经移植的生物材料。在众多的替代材料中,去细胞异体神经移植物显示了良好的应用前景。为了最大限度地去除异体神经免疫原性物质,同时较完好地保存神经内部结构和细胞外基质的活性成分,本课题对化学去细胞神经的制备方法进行了改良,并修复大鼠坐骨神经缺损,评价其再生效果。为了促进神经趋化性再生,最终提高神经修复效果,本课题研究了去细胞异体神经移植对神经轴突趋化性生长的影响,并建立大鼠脊髓背根神经节切除动物模型,为周围神经趋化性再生的定量评价提供有效的研究方法,并对化学去细胞异体神经移植物的促神经趋化性再生作用进行了定量评价。方法:(1)综合应用萃取剂Triton X-200、SB-10和SB-16对大鼠坐骨神经的化学处理方法进行改良,并与Sondell方法(应用萃取剂Triton X-100和脱氧胆酸钠)进行比较,从细胞、髓鞘的去除、结构完整性保存等方面综合评价制备物的质量。(2)将两种方法制备的去细胞异体神经及自体神经桥接大鼠坐骨神经缺损,从坐骨神经指数(SFI)、神经电生理、运动终板染色、再生神经纤维计算机图像分析等方面评价神经移植后的再生效果。(3)解剖研究大鼠坐骨神经的解剖组成及脊髓背根神经节的位置;背根神经节切除后3周,取双侧坐骨神经及其胫神经、腓神经、腓肠神经3分支行髓鞘染色,观察各神经中感觉纤维的溃变情况,行半薄切片甲苯胺兰染色,病理切片计算机图像分析计数,评价模型的可靠性。(4)去细胞异体神经及自体神经桥接大鼠坐骨神经缺损后3个月:部分实验动物行脊髓背根神经节切除术,术后3周取其腓肠神经行病理染色,病理切片计算机图像分析计数,并计算错接率,定量评价去细胞异体神经的促趋化性再生作用;不行脊髓背根神经节切除术的实验动物,取其腓肠神行乙酰胆碱酯酶和碳酸酐酶染色,定性或半定量评价去细胞异体神经的促趋化性再生作用。结果:(1)两种方法制备的移植物去细胞效果均较好。与Sondell法相比,改良法对髓鞘的去除较彻底、对神经结构的破坏较小、对基底膜素的保留较多、综合质量评分较好。(2)移植后神经再生效果:改良法SFI测量结果优于Sondell法,运动神经传导速度较快、腓肠肌萎缩较轻、再生运动终板较多、神经纤维平均直径及髓鞘平均厚度较好,基本上达到了与自体神经移植相当的效果。(3)DRG切除术后,腓肠神经(纯感觉神经)中有髓神经纤维髓鞘完全溃变,坐骨神经、胫神经、腓神经中部分有髓神经纤维发生溃变。(4)乙酰胆碱酯酶、碳酸酐酶染色定性评价:同自体神经移植组比较,去细胞异体神经移植组中腓肠神经乙酰胆碱酯酶染色棕色颗粒较少,碳酸酐酶染色黑色颗粒较多。脊髓背根神经节切除定量评价:去细胞异体神经移植组中,腓肠神经发生溃变的神经纤维较多,未溃变的神经纤维较少。去细胞异体神经移植组和自体神经移植组腓肠神经中运动纤维的错接率分别为2.27%和7.65%,有明显的统计学差异。结论:(1)综合运用萃取剂Triton X-200、SB-10和SB-16的化学萃取方法,是一种较为理想的异体神经移植物制备方法,能够制备出免疫物质清除完全、神经结构保存较好的去细胞异体神经移植物。(2)DRG切除模型可靠性好,能够较好地定量评价周围神经的趋化性再生效果,可作为不同修复材料和修复方法促趋化性再生效果的定量评价方法。(3)化学去细胞异体神经移植物,具有明显的促神经趋化性再生作用。(4)化学去细胞异体神经移植物不但在桥接修复神经缺损中起到支架、支撑作用,还具有其它人工合成材料所不具备的、较强的促神经趋化性再生作用,化学去细胞异体神经移植物是一种理想的神经移植物,有望替代自体神经移植。