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研究背景胰腺癌是一种较常见的消化系统恶性肿瘤,在恶性肿瘤死亡人数中排名第四位。其恶性程度高,死亡率高,术后复发率高,5年生存率不到3%。胰腺癌的发生和多个信号通路的激活和失活存在联系,其中Hh-Gli信号通路在胰腺癌的发生、发展中起着关键性的作用。Gli作为Hh-Gli信号通路的终末分子,在肿瘤研究中受到广泛的关注,肿瘤组织内Gli转录因子表达水平存在显著的提高。脊椎动物中有三种Gli转录因子(Gli-1、Gli-2、Gli-3), Gli-1 mRNA的表达水平在反映Hh-Gli信号通路活性程度时是的一个可靠指标。利用小干扰RNA阻断Gli-1核转录因子成为胰腺癌治疗的一种全新策略。本研究以Gli-1 siRNA转染胰腺癌细胞(PANC-1细胞系),观察其对靶细胞增殖及凋亡的影响。目前,基因干预治疗成为肿瘤治疗研究中的新热点,并取得了可喜成果,对胰腺癌分子生物学机制的研究显得十分重要,通过本实验的研究进一步为临床应用提供新的思路和方法。目的以Gli-1 siRNA转染胰腺癌细胞系PANC-1,研究其阻断Hh-Gli-1信号通路的作用效果,并观察其对靶细胞增殖及凋亡的影响。方法PANC-1胰腺癌细胞株做传代培养,随机PANC-1细胞分为实验组,阴性对照组,空白对照组。实验组以Gli-1 siRNA转染PANC-1细胞,阴性对照组以nonspecific control siRNA转染PANC-1细胞,空白对照组PANC-1细胞给予不含抗生素的无血清的高糖DMEM细胞培养液,转染后24h后,各组细胞采用RT-PCR检测Gli-1表达水平的变化,MTT法测定细胞生长曲线观察细胞增殖的情况。结果Gli-1 siRNA转染胰腺癌细胞系PANC-1后,PCR结果显示:实验组相对于阴性对照组,Gli-1 siRNA明显减少Gli-1 mRNA的表达(P<0.05),具有统计学意义;实验组相对于空白对照组,Gli-1 siRNA明显减少Gli-1 mRNA的表达(P<0.05),具有统计学意义;阴性对照组和空白对照组Gli-1 mRNA的表达没有明显变化(P>0.05)。MTT结果显示:实验组相对于阴性对照组,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05),具有统计学意义;实验组相对于空白对照组,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05),具有统计学意义;阴性对照组和空白对照组细胞增殖没有明显变化(P>0.05)。结论实验初步证明Gli-1在Hh-Gli信号通路中发挥着重要作用,Gli-1 siRNA可以通过有效的阻断Gli-1 mRNA的转录,阻止下游基因的表达,从而抑制PANC-1的增殖并诱导细胞凋亡。