【摘 要】
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目的: 1.建立人视网膜微血管内皮细胞的体外培养方法; 2.检测高浓度葡萄糖对培养的人视网膜微血管内皮细胞屏障功能的影响,并探讨产生影响的机理。 材料和方法: 1.取眼库提供
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目的: 1.建立人视网膜微血管内皮细胞的体外培养方法; 2.检测高浓度葡萄糖对培养的人视网膜微血管内皮细胞屏障功能的影响,并探讨产生影响的机理。 材料和方法: 1.取眼库提供的正常人视网膜,经洗涤、剪碎、胶原酶消化、细胞滤网过滤,并与标记CD31抗体的免疫磁珠孵育结合,经细胞磁分离系统分离,取得纯化的人视网膜微血管内皮细胞。 2.纯化的人视网膜微血管内皮细胞经传代培养,使用小鼠抗人Von Willebrand因子抗体和FITC标记的山羊抗小鼠IgG抗体进行免疫组化和流式细胞术鉴定。 3.传代细胞,待细胞融合后随机分为3组,分别更换为葡萄糖浓度5.6mmol/L、15.6mmol/L、25mmol/L的DMEM培养液。 4.更换培养液后第3d和第1、2、3、4周,以MTT法观察人视网膜微血管内皮细胞在不同浓度葡萄糖培养液中的活性;细胞电阻计测量人视网膜微血管内皮细胞在不同浓度葡萄糖培养液中的TER;Western Blot法观察人视网膜微血管内皮细胞在不同浓度葡萄糖培养液中表达紧密
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