食品安全是一重要的社会民生问题，猪肉是人类主要的动物食品，但猪及其制品易受沙门菌感染，威胁着食品安全及人类健康。猪霍乱沙门菌为宿主适应性沙门菌，易引起2-4月龄仔猪副伤寒病，发病死亡率较高，对养猪业中有着严重的危害。同时，鼠伤寒沙门菌作为沙门菌最常见血清型，其动物宿主广泛，包括猪，是重要的食源性病原菌之一，也是人类食物中毒主要原因。实践证明，疫苗是防控猪沙门菌病的有效措施之一。　　猪霍乱沙门菌C500株已经作为减毒疫苗使用40余年，该疫苗可从动物饲养源头控制沙门菌对动物的感染和侵害，能有效预防仔猪副伤寒，并减少沙门菌对肉产品的污染，从而减少沙门菌通过食物链感染人类，阻断沙门菌人畜之间传播，防止沙门菌病的发生。该疫苗在疾病防控中发挥重大作用，但遗憾的是动物接种该疫苗后不能通过基于玻板凝集的试验方法，简单快速鉴别动物是被免疫还是被感染(Differentiating Infected from VaccinatedAnimals，DIVA)。为此，本研究构建猪霍乱沙门菌的LPS相关基因rfaJ缺失株，致力于区分免疫动物和自然感染动物。另外，还构建了鼠伤寒沙门菌D6的faJ缺失株，并对它们生物学特性和免疫保护进行了评价，初步探索了rfaJ基因在DIVA疫苗设计及其鉴别诊断中的应用潜能。　　1.猪霍乱沙门菌rfaJ基因缺失株的构建及其生物学特性研究　　本研究利用λ-red同源重组方法构建了猪霍乱沙门菌C500ΔrfaJ缺失株，测序和PCR鉴定结果表明，rfaJ基因从基因组中缺失，同时构建了回复株C500Δrfa∷rfaJ。缺失株C500ΔrfaJ的生长速度与野生株C500相比无明显变化，液体培养缺失株C500ΔrfaJ易发生自凝集沉淀现象。与亲本株C500相比，缺失株LPS结构因O抗原缺失而不再完整，细菌由光滑型变为粗糙型。C500ΔrfaJ免疫后的小鼠血清不与亲本株C500发生凝集，能够区分感染动物和免疫动物的血清。缺失株C500ΔrfaJ感染猪空肠上皮细胞IPEC-J2后，缺失株C500ΔrfaJ对细胞的黏附和侵染能力有明显下降(P＜0.01），其在细胞内增殖能力无显著变化。荧光定量PCR方法检测C500ΔrfaJ刺激细胞后细胞炎性因子mRNA表达水平，结果显示，与亲本株C500感染细胞组相比，TNF-α、IL-4与IL-6表达水平明显下降。　　2.鼠伤寒沙门菌rfJ基因缺失株的构建及其生物学特性研究　　以鼠伤寒沙门菌D6为研究对象，构建了D6ΔrfaJ基因缺失株及其回复株D6ΔrfaJ∷rfaJ。鼠伤寒沙门菌D6ΔrfaJ基因缺失株生物特性与猪霍乱沙门菌缺失株C500ΔrfaJ的生物特性基本一致。缺失株D6ΔrfaJ生长速度与野生株相比无明显变化，液体培养过程中缺失株发生自凝集沉淀;与其亲本株D6相比较，D6ΔrfaJ的LPS结构因O抗原缺失不再完整，细菌由光滑型变为粗糙型，D6ΔrfaJ免疫后的小鼠血清不与其亲本株D6发生凝集。然而，有些生物学特性发生了改变，多项生化指标发生改变，缺失株运动能力下降。以缺失株D6ΔrfaJ和亲本株D6分别感染猪空肠上皮细胞IPEC-J2后发现，缺失株D6ΔrfaJ对细胞的黏附和侵染能力有明显下降，但增殖能力无特别明显变化，并在感染8h后缺失株的增殖能力超过亲本株D6;以BALB/c为动物模型，口服途径免疫6周龄小鼠，间隔2周，再次免疫，2周后以口服途径攻毒，对D6ΔrfaJ进行了免疫保护效力评价，结果显示，血清中抗体水平在14d时达到较高水平，并且小鼠经2次免疫后两周，能够对高毒力菌株SL1344提供80％的免疫保护;缺失株D6ΔrfaJ在体内脏器和粪便中的带菌时间低于亲本株D6在体内存在时间;口服细菌后，相比较亲本株D6，缺失株感染组小鼠脏器的病理切片无明显病灶。　　综上所述，D6ΔrfaJ不仅具有良好的安全性，同时能提供良好的免疫保护力，为鼠伤寒沙门菌DIVA疫苗设计奠定重要的基础。