【摘 要】
：
背景:肺动静脉畸形（PAVMs）是一种以肺部动脉和肺部静脉直接连通为主要特征的血管性疾病,其可通过CT或者增强CT明确诊断。当这种病理改变累及到整个肺叶的小动脉和小静脉时候,则称之为弥漫性肺动静脉畸形（dPAVMs）。遗传性毛细血管扩张（HHT）是目前肺动静脉畸形最常见原因。研究表明约80%-90%的PAVMs是由HHT引起。到目前为止,通过采用候选基因法和外显子组测序等技术,共鉴定出了4个与肺动
论文部分内容阅读
背景:肺动静脉畸形（PAVMs）是一种以肺部动脉和肺部静脉直接连通为主要特征的血管性疾病,其可通过CT或者增强CT明确诊断。当这种病理改变累及到整个肺叶的小动脉和小静脉时候,则称之为弥漫性肺动静脉畸形（dPAVMs）。遗传性毛细血管扩张（HHT）是目前肺动静脉畸形最常见原因。研究表明约80%-90%的PAVMs是由HHT引起。到目前为止,通过采用候选基因法和外显子组测序等技术,共鉴定出了4个与肺动静脉畸形疾病相关的HHT基因。然而,仍有10%-20%的PAVMs的发病原因不明,使用已知的致病基因及其突变无法解释,这提示PAVMs的遗传特征具有异质性,新的致病基因可能会存在。通过收集一个近亲结婚的弥漫性肺动静脉畸形家系,并进行已知基因筛查和排除、外显子组测序和生物信息学等筛选、正常人群突变鉴定及细胞系和模式动物的功能学研究,进而发现弥漫性肺动静脉畸形新的致病基因,并对其可能机理进行探讨。方法:收集家系成员先证者及其家属的外周血和先证者肺部活检组织,收集500名对照个体的外周静脉血。使用蛋白酶K法提取DNA,使用Sanger测序技术筛查已知致病基因EVG、ACVRL1、SMAD4和RASA1;使用外显子组测序（WES）和微阵列比较基因组杂交（aCGH）技术对弥漫性肺动静脉畸形家系进行全基因范围的筛查,以筛选潜在的可能致病基因和突变。使用遗传模式分析、Exac数据库、SIFT和polyphen-2等技术进行生物信息学分析,确定最终候选基因。使用CD31等指标对先证者的肺组织微血管畸形情况进行检测,使用免疫组化技术分析候选基因在先证者活检肺组织中的表达情况和血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况,使用普鲁士蓝染色观察先证者肺组织的Fe3+水平。采用lipo2000转染试剂进行转染,观察将NARFL基因的野生型和p.Ser161Ile突变型真核表达pCMV-HA质粒,转入HEK293T细胞,研究其对NARFL mRNA稳定性的影响。采用lipo2000转染试剂进行pSUPER真核干扰质粒转染,观察将NARFL基因敲降对乌头酸酶活性的影响。采用CRISPR/Cas9技术对斑马鱼进行基因编辑,使narfl形成不同基因型的突变,采用PAGE凝胶电泳和Sanger测序检测narfl在斑马鱼胚胎中的基因型;使用碱性磷酸酶染色观察斑马鱼血管的异常表型;运用激光共聚焦显微镜观察血管带有荧光的突变型斑马鱼肠下血管变化情况;采用RT-PCR技术检测突变型斑马鱼的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的表达水平。结果:排除了已知基因ENG、ACVRL1、SMAD4和RASA1的突变后,发现了一个新的致病基因及其突变:NARFL基因,纯合性错义突变（hg19NM022493 c.482G>T,p.Ser161Ile）。纯合突变存在于先证者和其姐姐中,而在祖母、外祖母、父母、哥哥成员中为杂合存在,在外祖父中为野生型。在500名对照个体中和Exac数据库中均未发现此突变,证实其不是单个核苷酸多态性（SNP）,且具有基因型和临床表型的共分离。先证者肺组织CD31等血管内皮细胞指标显示其血管畸形明显,VEGF表达和Fe3+水平明显升高。pCMV-HA-NARFL野生型和突变型真核表达载体转染HEK293T后,与野生型组相比,Ser161Ile突变型NARFL mRNA和蛋白稳定性明显下降,降解速度加快。在HEK293T中NARFL敲降后,乌头酸酶的活性明显降低。斑马鱼模型研究发现,narfl敲除后的斑马鱼出现肠下血管畸形的异常表型。激光共聚焦显微镜观察了野生型和Ser161Ile突变型的肠下血管畸形情况,发现突变体肠下血管异常出芽,静脉主芽回缩受抑制,肠下血管重塑障碍。突变型斑马鱼中的超氧化物歧化酶（sodl）和过氧化氢酶（cat）表达水平明显降低。结论:近亲结婚的弥漫性肺动静脉畸形家系中通过WES发现新的致病基因NARFL及其纯合性突变Ser161Ile。突变型NARFL mRNA稳定性下降,敲降NARFL后乌头酸酶的活性降低。Narfl敲除的斑马鱼出现肠下血管畸形、肠下血管出芽回缩受抑制、相互连接血管长度缩短,亦出现sodl和cat水平降低的表现。这些结果表明NARFL是dPAVMs致病基因。
其他文献
第一部分转录因子Tcf7l2在髓鞘发育过程中功能影响的研究目的：通过条件性敲除（cKO）转录因子Tcf7l2（也称Tcf4）,以研究Tcf7l2对中枢神经系统（CNS）髓鞘发育功能的影响。方法：以Cnp-Cre/Tcf7l2fl/fl及Olig2-Cre/Tcf7l2fl/fl（Tcf7l2 cKO）这两种小鼠为实验组,Tcf7l2fl/fl（Tcf7l2未敲除）小鼠为对照组,在小鼠出生后不同时间
第一部分 老年人前列腺疾病的临床分析目的：探讨老年人几种常见前列腺疾病的临床特点及关系。方法：收集符合年龄标准的良性前列腺增生（BPH）患者、前列腺上皮内瘤（PIN）患者和前列腺癌（PCa）患者的临床资料。三组患者均留取清洁中段尿送检尿培养并以化学发光法检测血清前列腺特异性抗原（PSA,包括tPSA和cPSA）水平。结果：老年人前列腺疾病共255例,其中BPH 111例,PIN 57例,PCa 8
[目的]义齿性口炎多由白色念珠菌感染引起,是困扰活动义齿佩戴者的常见疾病。本研究通过生物量热技术监测姜黄素、氯已定、益康唑、咪康唑四种抗真菌药物对白色念珠菌的抑制效果,观察口腔义齿金属材料表面上白色念珠菌的附着和生长情况,并评价抗真菌药物对义齿金属材料上白色念珠菌生长代谢的影响。研究共分三部分：第一部分用量热技术监测四种抗真菌药物对白色念珠菌生长代谢的影响,获得相关热动力学参数,说明四种抗真菌药物
随着能源危机和环境问题的逐渐加重,以及未来以便携化、微小型化为发展目标的智能电子设备的供电需求。人类需要一种能够实现持续供电、不受体积限制且清洁无污染的新能源技术。纳米发电机（Nanogenerator,NG）是一种全新的微型能量转换装置,它可以不断收集环境中各种离散的机械能,并将这些能量转化为电能驱动电子设备,实现低频机械触发的高效能量转换。更重要的是,纳米发电机的成本低、原料易得、在工作过程中
循环肿瘤细胞（CTCs）目前被认为是恶性肿瘤复发转移的重要途径之一。因此,检测捕获病人CTCs具有重要的临床价值和实际应用意义。但是,目前由于循环肿瘤细胞在外周血中微乎其微,这对于CTCs的临床检测和应用是一个严峻的考验。肝癌（hepatoce llular cac ino ma, HCC）作为世界范围内常见的恶性肿瘤,死亡率居世界第三位,而复发和转移是导致死亡的最常见原因。肝癌细胞可以在肿瘤发生
阿尔茨海默病（AD）是一种老年化的神经退行性疾病,其典型的病理特征之一是β-淀粉样蛋白（Aβ）在大脑中沉积形成老年斑（SP）。早期的流行病学研究发现,雌激素替代疗法（ERT）虽然可以提高绝经后女性的认知能力,但是会增加病人罹患乳腺癌和子宫内膜癌的风险。因此,其临床应用受到限制。选择性雌激素受体调节剂（SERMs）是一类具有雌激素激动或拮抗活性的化合物。由于其组织选择性,近年来SERMs已经成为一类
骨关节炎（osteoarthritis, OA）是一种以关节软骨退行性变为主要病理特征的慢性关节疾病,常引起关节疼痛甚至残疾,严重影响患者生活质量,给社会和家庭带来巨大经济负担。然而,迄今有关OA的病因及发病机制仍不清楚。传统观点认为,OA为老年退行性疾病。其发病与年龄、性别、创伤、机械摩擦、职业、体重及运动量等因素有关。近来研究显示,OA与代谢综合征（metabolic syndrome, MS
拉帕醌、剑麻素A、荧光素等活性分子均为氧杂环化合物，具有抗菌、抗结核、抑制心律失常等活性.高效构建该骨架是有机合成的热点.双环化反应是近年来合成氧杂环化合物常用的方法之一.文章综述了双环化反应在构建氧杂环骨架中的应用，对深入探究该类衍生物的高效合成奠定了基础.
第一部分温度敏感性水凝胶植入对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用背景：急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）是冠心病（coronary artery heart disease,CHD）患者死亡的主要原因,严重危害人类健康。早期、充分、持续地开通梗死相关动脉,使缺血心肌及时获得充分灌注是挽救濒临坏死的心肌、缩小梗死范围、防止心室重构、改善临床预后、降低死亡率的
银川市积极探索学校思政教育一体化建设,突出党建引领,在学校思政工作的顶层设计、体系架构、实践路径中提出了大中小幼思想政治教育一体化建设,通过全员育人、全程育人、全方位育人,将思想政治工作贯穿教育教学整个过程,构建“三全育人”新格局。