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目的:观察新型异硫脲修饰姜黄素嘧啶类衍生物1g对人结肠癌细胞HCT116和HT29细胞增殖、自噬以及迁移侵袭的影响,探究可能的分子机制。方法:采用CCK-8法观察1g对结肠癌细胞HCT116和HT29的抑制作用;采用transwell方法检测HCT116和HT29的迁移和侵袭在1g(IC50)作用后的影响;采用透射电镜观察1g(IC50)作用HCT116和HT29细胞后自噬泡的形成;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测1g(IC50)作用后HCT116和HT29细胞LC3、MMP-2和MMP-9蛋白的表达。采用蛋白免疫印迹法检测1g(IC50)作用HCT116和HT29细胞后EMMPRIN、及PI3K/AKT/mTOR蛋白的表达;采用脂质体法对HCT116和HT29细胞分别转染EMMPRIN-siRNA和pCMV-EMMPRIN-FLAG重组质粒并采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测EMMPRIN mRNA的表达;采用蛋白免疫印迹法检测:对照组、1g组、1g+EMMPRIN-siRNA、1g+Negative siRNA;1g+pCMV-EMMPRIN-FLAG、1g+pCMV-FLAG、1g+pCMV-EMMPRIN-FLAG+PI3K抑制剂20μM(LY294002)组中HCT116和HT29细胞中LC3、EMMPRIN、PI3K/AKT/m TOR通路蛋白的表达。结果:CCK8检测结果可知,1g能够抑制人结肠癌细胞株HCT116、HT29细胞的增殖,细胞活性呈时间剂量依赖性(P<0.05);Transwell实验结果表明,与对照组相比,1g(IC50)组HCT116、HT29的迁移和侵袭细胞个数减少(P<0.01);透射电镜结果表明,正常组HCT116、HT29细胞质中未见明显自噬体,1g(IC50)组细胞可见自噬泡;Western blot结果显示,1g组中LC3Ⅱ表达量增加,MMP-2和MMP-9表达量降低(P<0.05)。Western blot结果显示,1g(IC50)作用下的HCT116和HT29细胞EMMPRIN蛋白表达量均降低(P<0.05),PI3K/AKT/mTOR通路磷酸化蛋白表达下降(P<0.05);qRT-PCR结果EMMPRIN在EMMPRIN-siRNA时低表达,在pCMV-EMMPRIN-FLAG时高表达(P<0.05);Western blot实验表明,1g组与对照组相比,细胞中EMMPRIN、P-PI3K/PI3K、P-AKT/AKT、P-mTOR/mTOR蛋白表达减少(P<0.05);相对于1g组,1g+pCMV-EMMPRIN-FLAG组中EMMPRIN、P-PI3K/PI3K、P-AKT/AKT、P-mTOR/mTOR蛋白表达增加(P<0.05),LC3II/LC3I蛋白表达减少(P<0.05),1g+pCMV-FLAG组则呈相反趋势;相对于1g+pCMV-EMMPRIN-FLAG组,通过PI3K抑制剂处理后EMMPRIN、P-PI3K/PI3K、P-AKT/AKT、P-mTOR/mTOR蛋白表达减少(P<0.05),LC3II/LC3I蛋白表达增加(P<0.05)。结论:姜黄素异硫脲嘧啶衍生物1g通过调控EMMPRIN抑制PI3K/AKT/mTOR通路可能是1g诱导HCT116和HT29细胞发生自噬的分子机制之一。