乳腺癌单细胞激光镊子拉曼光谱的实验研究

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目的:研究人正常上皮乳腺细胞株(HBL-100)和乳腺癌细胞株(MCF-7)的单细胞拉曼光谱与分子生物学变化之间的关系;乳腺正常组织和乳腺癌的单细胞拉曼光谱以及乳腺正常组织→乳腺癌发生发展过程中生物组分的变化与发病机理,通过光谱的对比分析,从而寻找反映乳腺癌癌变的特征标志光谱。方法:分别培养了乳腺正常细胞株和乳腺癌细胞株,同时收集确诊为乳腺癌病人手术后的新鲜标本,用机械分散法制备正常乳腺组织与乳腺癌组织的单细胞悬液,然后通过光镊拉曼光谱技术测出细胞的单细胞拉曼光谱,以同样的激发功率和曝光时间采集背景光谱,最后把细胞的拉曼光谱减去背景的光谱,最终得到单细胞的拉曼光谱。所得数据用oringin6.0软件处理,统计学用主成分分析方法。结果:1.比较分析了乳腺正常细胞和乳腺癌细胞间拉曼光谱的差异。通过比较两者的光谱发现,乳腺癌细胞和乳腺正常细胞间的平均光谱存在较多的差异;乳腺癌细胞的谱线强度整体变强;乳腺癌细胞的936、1002、1298、1445 cm-1的峰高升高;1102 cm-1峰移位到1094 cm-1; 484 cm-1峰消失;乳腺癌癌细胞的核酸、蛋白质、脂类等重要生物分子在结构或含量都发生了不同的改变。用PCA主成分对单个细胞的平均拉曼光谱进行分析,结果发现:PCA可以正确区分乳腺正常细胞和癌细胞,PCA区分率为87%(13/15)。2.乳腺癌细胞各代的平均拉曼光谱之间、正常乳腺细胞各代的平均拉曼光谱之间均无明显差别。3.对乳腺正常组织和乳腺癌组织的激光镊子拉曼光谱进行了研究。通过比较两者的光谱发现,乳腺癌组织和乳腺正常组织间的平均光谱存在显著的差异;乳腺癌组织的谱线强度整体变强;乳腺癌组织的716、752、875、936、1002、1078、1152、1258、1296、1338、1445、1652 cm-1的峰高升高;乳腺癌癌组织的核酸、蛋白质、脂类等重要生物分子在结构或含量都发生了不同的改变。结论:1.乳腺癌细胞与乳腺正常细胞相比,其拉曼光谱谱线发生了明显的变化。2.乳腺癌组织与正常组织相比,其拉曼光谱谱线也发生了明显的变化。3.激光镊子拉曼光谱是判断正常乳腺细胞和乳腺癌细胞的有效方法,单细胞光镊拉曼光谱技术有可能成为癌症诊断的新途径,具有非常广阔的前景。
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