【摘 要】
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油菜是我国重要的油料作物,田间杂草是造成油菜产量下降的重要原因,使用除草剂是控制杂草的有效途径之一。草胺膦是一种广谱性除草剂,可有效控制禾本科杂草和多年生的双子叶杂草,我国目前还没有具有自主知识产权的抗草胺膦油菜品种。本研究旨在将具有自主知识产权的新型草胺膦抗性基因Syn1-Rep导入到甘蓝型油菜中,创制具有草胺膦抗性的转基因油菜。主要研究结果如下:1.在农杆菌介导的油菜下胚轴转化实验中,在不同的
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油菜是我国重要的油料作物,田间杂草是造成油菜产量下降的重要原因,使用除草剂是控制杂草的有效途径之一。草胺膦是一种广谱性除草剂,可有效控制禾本科杂草和多年生的双子叶杂草,我国目前还没有具有自主知识产权的抗草胺膦油菜品种。本研究旨在将具有自主知识产权的新型草胺膦抗性基因Syn1-Rep导入到甘蓝型油菜中,创制具有草胺膦抗性的转基因油菜。主要研究结果如下:1.在农杆菌介导的油菜下胚轴转化实验中,在不同的草胺膦抗性筛选浓度选择压下,获得了27株转基因阳性株,根据再生率和阳性率的统计结果,将甘蓝型油菜品系甲9707的草胺膦抗性筛选浓度范围缩小至5 mg/L至10 mg/L之间。2.对17份T0代转基因单株的目的基因表达量进行了分析,结果显示Syn1-Rep基因在17株转化苗植株内均有表达。分析了21份基因拷贝数,鉴定出6株单拷贝插入的转基因材料。用Inverse-PCR方法,对其中的单拷贝材料18OV40 18-1和18OV40 21-12的T-DNA侧翼序列进行分析,确定了这两个材料的基因插入位置。3.对21株转Syn1-Rep基因的T0代油菜进行田间抗性表型鉴定,分别用3 L/ha、4.5 L/ha和9 L/ha的草胺膦商品制剂进行田间喷洒。在喷施3 L/ha（生产推荐浓度）草胺膦条件下,17株转化苗保持正常生长,而大部分对照在21天后死亡。42天后再次喷施浓度为9 L/ha的草胺膦,在喷药后7天出现不同程度的药害表现,但均不致死,而对照彻底死亡。喷施4.5 L/ha草胺膦的4株转化苗中有3株不受药害影响,1株雄蕊异常,对照在13天后彻底死亡。4.对转Syn1-Rep基因的单拷贝T1代材料18OV40 18-1、18OV40 21-10和18OV40 21-12进行了抗性鉴定,以甲9707为对照,设置了0 L/ha、3 L/ha、6 L/ha和12 L/ha共4个剂量处理。在处理后的第30天,统计存活的植株数。甲9707在处理后的第一周全部死亡,而T1代材料在4个剂量的草胺膦浓度下,植株的生长均没有受到明显的抑制作用,可见T1代转基因植株保持了对草胺膦的抗性。
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