【摘 要】
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该文研究CAUD启动子烟草中的表达特性,对全长及5序列部分缺失的启动子的功能进行了初步的研究.该研究分为三个部分:"CAUD启动子的同源序列比较","表达载体的构建与转基因烟草
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该文研究CAUD启动子烟草中的表达特性,对全长及5序列部分缺失的启动子的功能进行了初步的研究.该研究分为三个部分:"CAUD启动子的同源序列比较","表达载体的构建与转基因烟草的获得"以及"CAUD启动子的功能分析".首先经过同源序列比较,发现CAUD启动子与GeneBank库中的一个启动子TAZ1有超过97％同源性,推测所克隆到的片段可能是TAZ1或类似启动子.其次在研究中构建了含有CAUD系列缺失启动子,NOS终止子以及以Kan为选择标记,以GUS基因为报告基因的系列表达载体.表达载体经酶切鉴定正确.利用农杆菌介导的叶盘法转化烟草,利用Kan筛选培养,获得40余株Kan抗性苗,获得PCR检测阳性植株30余株.对其中15株系进行Southern杂交分析,结果表明CAUD启动子已整合进烟草基因组中.论文最后对CAUD启动子的功能进行了分析.对各个构建转化的不同株系的植株的各个器官进行GUS染色,发现除了pRDC-D构建转化的株系的花药均可以染成蓝色,花、茎、叶、根、花瓣、花萼、花丝等均不能染成蓝色.对照植株的花、茎、叶、根、花瓣、花萼、花丝、花药等均不能染成蓝色.为了明确转基因植株花药不同时期GUS基因表达情况,专门对花药发育的各个时期进行染色,结果表明此启动子不仅是花药特异性启动子,还是绒毡层表达的启动子,具有时空表达的特异性.此启动子表达部位与功能片段的确定对花药特异性基因的表达模式研究具有理论意义.可以把此启动子作为基因工程中的一个有用的表达调控元件.如此启动子可用来作为创造雄性不育系的一个启动子元件,进一步的研究正在进行当中.
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