【摘 要】
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S-层蛋白(S-layers protein)通常位于细菌和古生菌细胞壁或细胞膜外表面,呈单分子晶格状结构。这些蛋白具有独特的固有属性,易被化学剂破裂,蛋白晶体又可重新装配成最初的晶
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S-层蛋白(S-layers protein)通常位于细菌和古生菌细胞壁或细胞膜外表面,呈单分子晶格状结构。这些蛋白具有独特的固有属性,易被化学剂破裂,蛋白晶体又可重新装配成最初的晶格。其功能有维持细菌细胞的形状,结合高分子量的酶类,黏附、侵袭靶细胞等,是菌体适应环境的重要结构。某些乳酸杆菌表面也有S-层蛋白质的存在,其分子量大约在25-71KDa之间。微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)寄生于人体和哺乳动物体内,可导致隐孢子虫病。隐孢子虫生活史的各期都有与致病和免疫相关的抗原蛋白,已报告了三十多种疫苗候选分子,如GP900、CSL、Cp23、Cp15/40/60、Cp12和Cp21等,其中Cp23由于基因序列的保守性和具有较强的免疫活性等优点,其编码的隐孢子虫子孢子表面抗原被大多数学者认为是微小隐孢子虫免疫诊断和疫苗研制的最佳靶抗原。本研究应用分子生物学相关技术和方法,对短乳杆菌S-层蛋白基因进行克隆分析,并构建表面抗原Cp23基因与S-层蛋白基因嵌合的原核型表达载体,为实现多基因融合的联合型疫苗载体的研制奠定基础。本实验结果如下：1.在已经初步鉴定出的乳酸菌中,应用SDS-PAGE和PCR方法分别在蛋白质和核酸水平上普查和鉴定S-层蛋白和slp基因,并初步鉴定出短乳杆菌的S-层蛋白,其大小约为47kDa。2.应用Genetyx等生物学分析软件和分析工具对短乳杆菌slp基因序列进行分析,由测序结果得知,短小乳杆菌样品有效的核苷酸序列为1263bp,推导出421个氨基酸,并确定外源基因插入的准确位点。3.应用DNA重组技术,将外源Cp23基因插入slp基因中,成功构建嵌合型重组质粒pET30a-slp-P23.4.将重组质粒转入E.coil BL21,经IPTG诱导表达,应用SDS-PAGE和Western blotting检测,结果显示阳性。
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