研究背景淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)隶属于沙粒病毒科家族,自然宿主是啮齿类动物,常见的如家鼠、宠物鼠、仓鼠等都是它的天然携带者。它可以通过唾液、鼻分泌物、乳汁、精液、尿液和粪便使病毒得以传播,也可以通过其它途径,如皮肤、粘膜伤口、胎盘甚至病毒粒子气溶胶的形式传播。宿主感染了LCMV病毒后大都无明显的症状,这就成为了LCMV可以大面积地隐匿性传播的前提条件。人们很容易低估了LCMV感染的广泛性。通过对LCMV的研究,人类在诸如T细胞的MHC限制性、CD8+T细胞和CD4+T细胞在清除病毒过程中作用、T细胞耗竭、免疫耐受等方面取得了里程碑式的重大发现。其中的Armstrong和Cl-13两个亚型因为基因组的微小差异而引起宿主急慢性感染的巨大差异被众多实验室作为模式病毒,深入地研究免疫系统对急慢性感染的病理变化以及对慢性感染的深入研究。目前对LCMV慢性感染的认识也已经扩展到了HIV、结核病、乙肝、丙肝、自身免疫病和肿瘤的领域。而LCMV可以通过多种途径实现动物-人的传播。由于人类感染了LCMV病毒通常无明显症状,或者出现轻微的非特异性症状而自愈,故导致人们很容易忽视它的存在。而在特定条件下,如妊娠、免疫功能低下或者器官移植时出现机会感染,对人类健康造成极大威胁。GP2是LCMV穿膜蛋白,位于LCMV粒子表面,同GP1共同起修饰病毒表面的作用,同时它在病毒感染宿主细胞时担负了通过变构而触发病毒膜与细胞膜的融合功能。但目前国内外实验室对于LCMV的检测仍在使用免疫血清或者RT-PCR法,到目前为止暂未出现抗LCMV GP2的单克隆抗体的商品,因此研发抗LCMV GP2的mAb在科研和临床有重要的现实意义。研究目的本研究的目的是制备针对LCMV GP2的m Ab,为开发酶标或者荧光标记的检测抗体打下基础,为以后的免疫治疗提供可能;也可以利用该抗体亲和纯化GP2,从而进一步研究其结构和功能、LCMV疫苗的开发做好物质准备。实验方法采用杂交技术获得并筛选出杂交瘤细胞,收集含mAb的培养上清行免疫荧光(IFA)、dot-blot、ELISA法鉴定抗体重链类型和测定mAb的免疫效价。用蛋白G Sepharose亲和层析填料纯化抗体,纯化后的抗体采用SDS-PAGE检测纯化效果,并进一步用Western-blot检查抗体对LCMV的作用部位。实验结果成功获得能稳定分泌抗LCMV的特异性杂交瘤细胞株,顺利获得纯化的mAb。IFA、dot-blot结果均证实获得的mAb能识别LCMV抗原。用ELISA法鉴定出该mAb重链类型为IgG2b,培养液免疫效价约为1.35×103。蛋白G亲和层析填料纯化抗体后经SDS-PAGE考马斯亮蓝R250检测证实纯化抗体纯度高。Western-blot提示该m Ab对LCMV的作用部位为病毒颗粒表面糖蛋白抗原GP2。结论成功制备出了针对LCMV病毒颗粒表面糖蛋白抗原GP2高亲和力的m Ab,抗体类型是IgG2b。