改良手术法宫腔注射骨桥蛋白在小鼠胚泡着床过程中的作用探讨

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研究目的:(1)探讨宫腔注射OPN与小鼠胚泡着床的相关性,(2)从子宫内膜肿瘤发生与发展的角度初步观察宫腔注射OPN的安全性,(3)为提高ART(assisted reproductive technology,辅助生殖技术)中胚胎着床的成功率提供新技术。研究内容:(1)本课题采用以6周龄性成熟ICR(Institute of Cancer Research,美国癌症研究所)小鼠为研究对象,尝试对经典手术宫腔注射法进行简化、改良,采用不同于经典手术宫腔注射法的手术切口,即在小鼠耻骨联合上缘0.5cm,腹部正中线处做一长约1cm的手术切口,并以此进入腹腔暴露小鼠子宫,进行宫腔注射的改良;(2)本课题通过OPN elisa(enzyme-linked immuno sorbent assay,酶联免疫吸附测定)试剂盒检测宫腔注射NS、OPN前后子宫体OPN含量变化,初步探讨改良手术宫腔注射法的注射效率;(3)本课题建立小鼠自然受孕模型,根据干预措施的不同将ICR小鼠按照随机数表法随机分组为三组:空白组、NS组、OPN组(n=8);在受孕后第四天(记为D4)进行改良手术法宫腔注射NS、 OPN,并于受孕后第八天(D8)处死并解剖小鼠,观察不同组小鼠的妊娠率及平均着床数,探讨OPN在小鼠胚泡着床中的作用:(4)本课题通过免疫组化法检测宫腔注射后各组小鼠(n=8)D5子宫内膜E-cad (E-cadherin,E-钙粘蛋白)、VIM (vimentin,波形蛋白)表达水平变化,探讨宫腔注射OPN对子宫内膜细胞EMT(Epithelial-mesenchymal transition,上皮间质转换)的影响,从肿瘤的发生与发展角度初步探讨宫腔注射OPN的安全性。研究结果:(1)NS组OPN含量(9.91±5.75ng/L)较空白组(16.06+3.96ng/L)略微下降,但差异无统计学意义(P>0.05);OPN组OPN含量(60.20±15.10ng/L)明显高于NS组及空白组,差异具有统计学意义(p<0.05)。(2)NS组妊娠率及平均着床数(12.5%,0.3±0.7)均低于空白组(75.0%,9.1±5.9)、OPN组(62.5%,4.6±4.1),差异具有统计学意义(p<0.05);OPN组妊娠率及平均着床数低于空白组,但妊娠率的差异不具有统计学意义(p>0.05),平均着床数的差异具有统计学意义(p<0.05);(3)空白组、NS组、OPN组E-cad强阳性(+++)率表达均为75%,VIM弱阳性(+)表达率均为75%,三者之间差异无统计学意义(p>0.05)。研究结论:(1)通过改良手术宫腔注射法注射OPN可有效提高子宫OPN含量;(2)通过改良手术宫腔注射法注射NS可显著降低小鼠妊娠率及着床数;(3)宫腔注射OPN可以提高小鼠的妊娠率及胚泡着床数;(4)宫腔注射OPN对小鼠子宫内膜EMT无影响。
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