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猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒引起的一种急性、热性、高度接触性的传染病,给世界各国养猪业带来严重的经济损失。猪瘟病毒是有囊膜的单股RNA病毒,与牛病毒性腹泻病毒及边界病病毒同属于黄病毒科瘟病毒属的成员。猪瘟病毒只有一个血清型,存在3个基因型,每个基因型具有3至4个亚基因型。目前,国内虽然采用猪瘟弱毒疫苗免疫接种有效地防控了该病的传播流行,但是猪瘟依然是严重影响我国养猪业发展的重要疫病。监测猪群中猪瘟的抗体水平、及时掌握猪群的感染情况及评价疫苗免疫的效果,对于防控猪瘟具有重要意义。近年来,随着E2亚单位疫苗在国内的逐渐推广应用,传统抗体检测方法已无法有效区分亚单位E2疫苗抗体和野毒抗体。为了监测猪群中猪瘟疫苗抗体水平,有效区分亚单位E2疫苗抗体和野毒抗体,本研究建立了基于E0蛋白的检测猪瘟血清抗体的间接ELISA方法。本研究应用RT-PCR技术扩增了猪瘟病毒的E0基因片段,并将其分别克隆到pGEX-4T-1与pET-28a载体,获得了pGEX-4T-1-E0与pET-28a-E0重组表达质粒。以IPTG诱导表达纯化的GST-E0和His-E0重组蛋白为包被抗原,建立检测猪瘟病毒E0抗体的间接ELISA方法。采用方阵滴定法,确定出GST-E0抗原和His-E0抗原的最佳包被量分别为50 ng/孔和100 ng/孔,血清最佳稀释度为160倍。对80份猪瘟阴性血清样品进行了检测与统计学分析,确定出GST-E0和His-E0重组蛋白的间接ELISA方法的临界值分别为0.167和0.176。特异性、敏感性和重复性试验结果表明,建立的基于GST-E0和His-E0蛋白的间接ELISA方法均具有特异、敏感和重复性好等优点。应用GST-E0和His-E0的间接ELISA方法及IDEXX猪瘟病毒抗体检测试剂盒平行检测88份猪血清样品,结果显示,基于GST-E0和His-E0的间接ELISA方法与IDEXX猪瘟病毒抗体检测试剂盒的符合率分别为78.41%和84.09%。以猪瘟病毒接毒细胞为抗原,应用免疫荧光试验(IFA)对His-E0间接ELISA和IDEXX检测试剂盒检出的阴性与阳性血清样品进行了验证,结果IFA与His-E0间接ELISA方法的符合率为93.18%;IFA与IDEXX试剂盒的符合率为90.91%,表明本试验所建立的用于检测猪瘟抗体的基于His-E0的间接ELISA方法与IDEXX猪瘟病毒抗体检测试剂盒具有相似的准确性。该研究结果为猪瘟抗体监测,鉴别E2亚单位疫苗免疫后的猪群中是否存在野毒感染提供了技术手段。