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背景卵巢癌在我国妇科肿瘤病死率高居第一位,具有5年生存率低、早诊率低、易复发等特点,严重威胁我国女性健康。卵巢癌的诊疗一直是临床难题,因为卵巢癌早期症状不明显,就诊率低,缺乏有效的早期诊断手段,2/3的患者初诊时已为晚期,失去手术时机。目前,虽然人附睾蛋白(HE4)、糖类抗原(CA125,CA199,CA153)等血清标志物的单独及联合应用,在卵巢癌的早期筛查、辅助诊断、治疗监测及预后评估中具有重要地位,但由于卵巢癌病因未知,目前缺少更可靠更有效早期诊断及预后评估的标记物,因此,在精准医学的时代背景之下,探索新的早期诊断卵巢癌的标志物对提高患者生存期至关重要。外泌体(exosome)是细胞内多囊泡体释放到细胞外直径为30-150 nm的小囊泡体。作为一种重要的细胞间信息及遗传物质传递载体,外泌体内含有DNA、RNA、蛋白质、脂质等多种活性物质,广泛分布于血液、尿液等体液中。目前发现大多数细胞均可产生外泌体,尤其是肿瘤源性细胞外泌体在肿瘤发生发展中扮演重要角色,是潜在的肿瘤标记物。上皮特异性黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,EpCAM)属于黏附分子家族,是由肿瘤相关钙信号转录基因编码的一个单次跨膜蛋白,参与调节细胞间黏附,介导信号转导、细胞迁移、增殖和分化等功能。EpCAM作为肿瘤诊断和治疗的候选蛋白,正受到越来越多的关注。V型胶原蛋白2链(Collagen type V alpha 2 chain,COL5A2)是一种低丰度纤维胶原蛋白的alpha链。COL5A2是间质细胞外基质的主要成分,在细胞形态、增殖、迁移、分化、凋亡、癌变等众多生物学过程中发挥着积极的作用。所以,肿瘤来源外泌体血浆外泌体EpCAM和COL5A2蛋白有望成为非侵入性的筛查肿瘤和评估预后的新的分子标志物。目的比较血浆外泌体蛋白浓度、血浆外泌体COL5A2和EpCAM蛋白在初治上皮性卵巢癌患者与卵巢良性疾病组、健康对照组之间表达水平差异,探索外泌体来源COL5A2和EpCAM蛋白在早期诊断及预后评估中的应用价值。方法纳入研究对象57例,其中24例卵巢癌术前、9例手术后、14例卵巢良性疾病,8例健康对照者及2例卵巢交界肿瘤患者的血浆,本研究采用聚合沉淀及超速离心联合方法提取血浆外泌体,通过透射电镜、纳米粒度和ZETA电位仪及Western blot对所提取的外泌体从形态、粒径及表面标志这三个角度进行表征验证;用BCA法对外泌体蛋白进行定量,用Western blot检测外泌体中COL5A2和EpCAM蛋白的表达情况。结果1.透射电镜下观察外泌体呈圆形茶托状,可见膜结构,直径在30-150 nm之间;通过纳米粒度和ZETA电位仪检测外泌体粒径,峰值在100 nm左右;Western blot检测本研究所提取的血浆外泌体有TSG101及LAMP-1的表达。本研究观察到的外泌体形态与先前文献报道一致。2.卵巢癌组与良性疾病组及正常组血浆外泌体总蛋白浓度差异显著(P<0.05);卵巢癌术前组血浆外泌体总蛋白浓度显著高于术后组(P<0.05);卵巢癌患者血浆外泌体蛋白浓度与其分期呈负相关(r=-0.519,P<0.01**)。3.卵巢癌组血浆外泌体EpCAM蛋白表达显著高于良性疾病组及正常组(P<0.05)。4.卵巢癌组血浆外泌体COL5A2蛋白表达显著高于良性疾病组及正常组(P<0.05);卵巢癌术前组血浆外泌体COL5A2蛋白表达显著高于术后组(P<0.05);卵巢癌早期(Ⅰ、Ⅱ期)血浆外泌体COL5A2蛋白表达与晚期(Ⅲ、Ⅳ期)有显著差异(P<0.001)。结论1.上皮性卵巢恶性肿瘤患者血浆外泌体蛋白浓度显著增高,EpCAM、COL5A2蛋白表达显著增高。2.上皮性卵巢恶性肿瘤患者血浆外泌体蛋白浓度及COL5A2蛋白表达水平与上皮性卵巢恶性肿分期相关。3.上皮性卵巢恶性肿瘤患者血浆外泌体蛋白浓度及COL5A2蛋白表达水平在术后显著降低。