子宫内膜异位症是常见的妇科疑难疾病之一,是指有活动功能的子宫内膜在正常子宫腔面以外的部位出现和增殖的疾病,长期以来,这种性质良性而行为却类似恶性的疾病一直困惑着临床医生。本课题着重探讨温肾化瘀中药治疗该病的理论基础,并初步建立人子宫内膜基质细胞的体外纯化培养方法,为研究温肾化瘀中药对子宫内膜异位症的影响及其作用机理提供实验模型。一、温肾化瘀中药治疗子宫内膜异位症的理论探讨祖国医学无子宫内膜异位症病名,其主要症状与中医的痛经,癥瘕,不孕等病症密切相关。因肾主生殖的功能异常,加之经期、产后生活不节等,导致冲任损伤及胞宫的藏泻功能异常,而发生本症,肾气虚多为发病之根本,血瘀是重要的致病因素和病理表现。治疗当从温肾化瘀着手。桂枝茯苓丸是《金匮要略》中用于妊娠之后癥积害胎,胎元不固者,我们在原方基础上去甘缓之蜜,加仙灵脾以温肾阳、血竭粉增强祛瘀散结的力量,组成桂苓消异方。这一理论为本课题以温肾化瘀中药进行子宫内膜异位症的体外实验研究,奠定了理论基础。二、初步建立人子宫内膜基质细胞的体外纯化培养方法收集2007年4月—2007年12月在扬州市第一人民医院和扬州市中医院妇产科接受手术治疗EMs患者的在位子宫内膜,用酶消化法原代分离培养间质细胞并传代,利用显微镜观察细胞生长增殖情况,免疫组化法鉴定细胞纯度。结果体外纯化的人子宫内膜基质细胞生长增殖状况良好,实验观察期间均为单一的间质细胞,细胞传代4-5代,成活25-30天。免疫组化显示所得的间质细胞纯度>95%。研究证实在本实验条件下,体外分离纯化的子宫内膜基质细胞具备良好的增殖能力,内膜基质细胞的取材途径与周期对细胞成活率以及增殖能力有影响(P<0.05),为揭示子宫内膜异位症的发病机制以及药效学研究提供良好的细胞体外模型。三、温肾化瘀中药对间质细胞形态以及培养上清液分泌IL-6的影响制备温肾化瘀中药药物血清,用不同药物剂量干预EMs患者的在位子宫内膜间质细胞,倒置显微镜下观察形态变化,并收集药物作用24h、48h、72h三个时间段的细胞培养上清液,用ELISA法检测其分泌的细胞因子IL-6。通过形态学观察,初步确定了温肾化瘀中药药物血清对人子宫内膜基质细胞的有效抑制,且呈浓度依赖性;温肾化瘀中药能明显降低子宫内膜细胞培养液中细胞因子IL-6的分泌。推测调节免疫、抑制子宫内膜局部炎症反应、减轻盆腔粘连可能是温肾化瘀中药控制子宫内膜异位发生发展的效应之一。