论文部分内容阅读
第一部分18F-Annexin B1在正常动物体内生物分布 目的:磷脂酰丝氨酸(phospatidylserine，PS)由细胞膜内侧翻转到细胞膜表面，是细胞凋亡级联反应的初始事件。膜联蛋白B1(Annexin B1)是一种新型细胞凋亡检测蛋白，在钙离子存在的条件下与PS具有很高的亲和力。因此，利用Annexin B1高度亲和PS可以早期检测凋亡的发生。本研究的目的是对18F-Annexin B1的体内生物分布情况进行评价与分析，为进一步研究18F-Annexin B1探测化疗后肿瘤细胞凋亡提供生物分布基础。 方法:以N-琥珀酰亚胺-4-[18F]氟苯甲酸酯(N-succinimidyl-4-[18F]fluorobenzoate，SFB)作为中间体将18F标记到Annexin B1上，从而获得新型细胞细胞凋亡分子显像探针18F-Annexin B1。检测18F-Annexin B1的标记率、放射化学纯度和稳定性。生物分布实验分两部分进行，第一部分:昆明小鼠经尾静脉注射18F-AnnexinB1，分别于注射后30min、60min、120min和240min将小鼠处死，取各主要脏器称重、测定放射性计数，并计算每克组织注射百分率(％ID/g)。第二部分:SD大鼠经尾静脉注射18F-Annexin B1，分别于注射后10min、20min、30min、60min、90min、120min和240min进行PET/CT多时相静态显像。利用Syngo平台3D软件处理图像，观察显像剂在大鼠体内代谢情况。 结果:分子显像探针18F-Annexin B1的放射化学纯度＞95％，经HPLC检测在小牛血清和PBS体系内（3个半衰期）均具有良好的稳定性，标记率为20％～30％。正常昆明小鼠体内分布结果可见肾脏放射性分布最高，各时相放射性分别为(1.5425±1.2006)％ID/g、(0.2410±0.1411)％ID/g、(0.2236±0.2367)％ID/g和(0.0646±0.0484)％ID/g，其次分别为肝脏、脾脏及心肌，脑组织内放射性分组最低，其余脏器各时间点放射性分布变化不明显。正常SD大鼠PET/CT显像结果显示，显像剂首先经过肝脏代谢，而后通过泌尿系统排泄，120min时肝脏、肾脏本底可降至较低水平。 结论:本研究结果表明，18F-Annexin B1在正常小鼠、大鼠体内均有较快的血液清除速率，主要经肝脏代谢、泌尿系统排泄。与文献报道相比，其在体内的放射性分布情况与18F-AnnexinⅤ基本相仿，而明显低于99mTc-annexin B1。 第二部分18F-Annexin B1 PET/CT显像探测单次化疗后荷瘤大鼠肿瘤细胞凋亡 目的：化疗是治疗恶性肿瘤最常用的方法之一，其作用的主要形式不是细胞被动死亡，而是细胞主动地发生凋亡。活体凋亡显像能够早期、无创、动态地监测肿瘤细胞治疗后的凋亡情况，准确地了解肿瘤细胞对化疗药物的反应，指导临床医生及时调整治疗方案，避免盲目的无效治疗，为临床个体化治疗方案的制定提供指导性意见。本研究的目的在于探讨活体细胞凋亡显像探针18F-Annexin B1在肿瘤动物模型中对化疗疗效早期评价的可行性，为进一步临床应用奠定实验基础。 方法：建立Walker-256荷瘤大鼠模型，待瘤体长至1cm时随机分为A、B两组，A组给予腹腔注射环磷酰胺(CTX，200mg/kg)，B组予腹腔注射等体积生理盐水。24h后静脉注射18F-Annexin B1，分别于注射后1h、2h、3h和4h进行PET/CT多时相静态显像。图像分析采用Syngo平台True D软件处理，利用感兴趣区(ROI)技术勾画肿瘤和对侧正常肌肉组织，获得二者SUVmax，并计算肿瘤/正常肌肉SUVmax比值(T/NT)。显像结束后将肿瘤组织制成5μ厚的病理石蜡切片，用HE染色法和原位缺口末端标记(TUNEL)染色法检测肿瘤细胞凋亡情况，并根据TUNEL染色图片计算凋亡指数(AI)，以AI反映肿瘤凋亡情况。统计学分析采用SSPS17.0软件，组间比较采用单因素方差分析，T/NT与AI做直线相关分析。 结果：两组荷瘤鼠静脉注射显像剂后各时相肿瘤均见显影，但A组各时相T/NT均明显高于B组，各时间点(1h，2h，3h，and4h) T/NT比值分别为:A组(4.38±0.56、6.75±1.16、6.44±1.12和4.81±0.17)和B组(2.35±0.14、2.99±0.55、3.04±0.41和2.33±0.47)，两组间差异有统计学意义（F值分别为23.790、16.913、14.046和77.517，P均＜0.05）。A组HE染色切片光镜下可见较多凋亡小体， TUNEL染色切片光镜下亦可证实化疗可以明显提高肿瘤细胞凋亡数量，且两种染色方法下所观察到的凋亡细胞均高于B组，TUNEL法AI分别为(21.00±0.04)％和(8.58±0.01)％，两组差异显著(F=21.539，P＜0.05)。T/NT值与AI间有很好的相关性(r=0.91，P＜0.05)。另从肉眼观察角度即肿瘤组织放射性摄取程度来看，1h时的肿瘤即可显影清晰。 结论:化疗能够引起肿瘤细胞凋亡，18F-Annexin B1能够显示凋亡且反应化疗疗效，是一种富有应用前景的活体细胞凋亡分子影像探针。