肾移植受者HLA-G5的基础和临床研究

来源 :中国人民解放军军医进修学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hunterfall_horse
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研究背景:HLA-G,非经典MHC-Ib类分子,具有多重免疫调节特性。在生理条件下,HLA-G表达于妊娠期的绒毛膜外的细胞滋养层,在诱导和维持母胎耐受机制中发挥重要的作用。在自身免疫性疾病、肿瘤、病毒感染、器官移植等情况下,HLA-G在血清、血浆中均有不同水平表达,其表现出的免疫调节作用也受到越来越多的关注。目的:本课题通过对比肾移植受者术前、术后与健康对照组HLA-G5的表达,了解HLA-G5与移植耐受的相关性以及不同免疫抑制剂对HLA-G5在’肾移植受者体内表达影响;通过分析对比HLA-G5表达高低两组的不同临床表现,研究HLA-G5在临床监测排斥反应、肾功能恢复、移植肾功能延迟恢复中的意义,对临床免疫抑制剂的应用以及减少免疫抑制剂用量及毒副作用有何指导作用;通过HLA-G5与肾移植受者体内的CD4+CD25+Treg细胞表达的相关性等,探讨HLA-G5与移植物排斥反应和诱导免疫耐受作用机制。方法:应用酶联免疫方法(ELISA)检测HLA-G5的在肾移植受者及健康对照组内表达情况;应用RT-PCR技术检测HLA-G5mRNA在肾移植受者体内表达情况;应用流式细胞术检测CD4+CD25+Treg细胞表达及HLA-G5+T细胞检测;应用体外单向混合淋巴细胞培养技术进一步探讨HLA-G5的免疫抑制性;应用SPSS13.0统计软件统计临床及实验数据。结果:ELISA检测健康对照组、肾移植术前组、肾移植后受者组HLA-G5值,分别为,健康对照组4.922±7.305 ng/ml,肾移植术前组152.575±64.462 ng/ml,肾移植后84天组210.232±107.285 ng/ml,三组间两两比较P值<0.01,差异有统计学意义,HLA-G5的表达随病程阶段呈现先增高后降低趋势;RT-PCR结果显示HLA-G5mRNA条带密度随病程变化而变化,其密度呈现增高后降低至术前水平趋势;无论是Tac组还是CsA组,HLA-G5表达水平随病程变化而变化,HLA-G5术后1天水平较术前下降,在术后14-28天HLA-G5表达水平较高,之后水平呈下降至术前趋势,两组间HLA-G5表达水平差异不显著,P值>0.05;移植术后早期肾功能恢复与HLA-G5表达水平相关性研究结果显示:HLA-G5高表达组(> 300ng/ml)血肌酐下降斜率为193.779±80.845 umol/天,而HLA-G5低表达组(<100ng/ml)血肌酐下降斜率为29.863±25.465 umol/天,P<0.01,差异有统计学意义;肾移植术后血红蛋白恢复至正常(或术前水平)所需时间在两组间比较,HLA-G5高表达组为21.556±6.464天,而低表达组为80.143±38.555天,P<0.05,差异有统计学意义;在Tac+MMF+Pred用药组中HLA-G5高表达组免疫抑制剂减药斜率为8.58 0±4.690,低表达组为1.433±0.752,P值<0.01,差异有统计学意义,在CsA+MMF+Pred用药组中HLA-G5高表达组免疫抑制剂减药斜率为3.633±1.041,低表达组为1.810±0.183,P值<0.05,差异有统计学意义,;HLA-G5高表达组无一例发生AR,而HLA-G5低表达组发生率43%,P值<0.05,差异具有统计学意义;HLA-G5高表达组术后1天、4天、7天CD4+CD25+Treg细胞出现频率与术前比较呈下降趋势,P值<0.05,差异具有统计学意义,术后14天、28天、56天、84天CD4+CD25+Treg细胞出现频率呈逐渐回升至术前水平趋势,而HLA-G5低表达组中,术后1天、4天、7天、14天、28天、56天、84天CD4+CD25+Treg细胞出现频率与术前比较维持在低位水平,差异有统计学意义;肾移植供、受者单向混合淋巴细胞培养增殖实验结果显示HLA-G+组淋巴细胞增殖明显低于空白对照组和HLA-G-组,P值<0.05,差异具有统计学意义;HLA-G5高表达组无一例发生DGF,而低表达组发生率为57%,P值<0.05,差异具有统计学意义。结论:HLA-G5在健康人群中可有表达,肾移植术前组、肾移植术后组浓度明显高于健康对照组,差异显著;基因水平HLA-G5的表达,随病程阶段不同表达也不同,不同时间点HLA-G5mRNA条带的相对丰度值呈先升高后降低趋势;无论是Tac组还是CsA组,HLA-G5表达水平随病程呈先增高后降低趋势,免疫抑制剂可能参与了诱导HLA-G5表达;肾移植术后早期HLA-G5表达水平与移植肾功能早期恢复密切相关,HLA-G5高表达者血肌酐下降速率较HLA-G5低表达者为快,且血红蛋白恢复至正常水平或术前水平所需时间短,急性排斥反应发生率低;肾移植术后早期HLA-G5高表达者免疫抑制剂减药速率较HLA-G5低表达者为快,在指导临床用药方面有一定的指导意义;HLA-G5可能通过诱导CD4+CD25+Treg细胞诱导移植物功能耐受,而具体机制有待进一步实验研究;DGF的发生与HLA-G5表达水平密切相关,HLA-G5可能通过减少急性排斥反应这一因素减少DGF的发生。
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