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目的:比较、选择符合肝硬化腹水药效评价与作用机制的实验动物模型:评价消胀贴膏对肝硬化腹水模型动物的药效作用;基于肝脏、腹膜血管通透性变化探讨消胀贴膏治疗肝硬化腹水的作用机制。
方法：本论文分为三个部分。
1.选择合适的实验动物模型。分别通过四氯化碳(CCl4)皮下注射、二甲基亚硝胺(DMN)腹腔注射、S180腹水瘤细胞株腹腔接种、CCl4灌胃方法对大鼠、小鼠建立肝硬化腹水模型。实验动物分为正常与模型两组。观察腹水、成模率及死亡率。试剂盒法检测血清肝功能(ALT、Alb、Tbil、TP),HE染色和天狼星红染色分别观察肝脏炎症及胶原沉积的病理改变。
2.选择DMN腹腔注射小鼠模型及CCl4灌胃大鼠模型,分为正常-空白组、正常-安慰剂组、正常-消胀贴膏组、模型-空白组、模型-安慰剂组、高剂量组、中剂量组、低剂量组,B超鉴定模型成立后,给药7天,一日一换,橡皮膏固定。观察各组腹水、腹围、体重变化情况。试剂盒法检测血清肝功能(ALT、Alb、Tbil),HE染色和天狼星红染色分别观察肝脏炎症及胶原沉积的病理改变。
3.DMN腹腔注射小鼠模型,分为正常组、模型组、敷贴组,模型成立后,给药7天,一日一换,橡皮膏固定。检测腹膜、肝脏伊文氏蓝(EB)渗透含量及血清NO含量,蛋白印迹法分析肝脏组织内VEGF的蛋白表达变化。
结果：
1.通过5种模型比较,发现以DMN腹腔注射小鼠模型及CCl4灌胃大鼠模型两种模型成模率高,死亡率低;与正常组比较,模型组实验动物表现出肝硬化腹水的特点,有血清肝功能异常、胶原沉积及炎症细胞浸润的病理改变。
2.与正常组比较,正常-安慰剂组与正常-消胀贴膏组的大鼠无明显差异;与模型组比较,消胀贴膏3种剂量,用药后大鼠腹水量均能减少,腹围变小,体重减轻。但其对血清肝功能及病理变化无明显改善。
3.与正常组比较,模型组腹膜、肝脏血管渗漏伊文氏蓝(EB)含量明显增多,血清NO浓度明显增加,肝组织中VEGF蛋白表达明显增加。而与模型组比较,敷贴组腹腔中的EB渗漏含量明显减少,肝组织中的EB含量无明显差异,血清NO浓度明显减少,肝组织中VEGF蛋白表达明显减少。
结论：
1.DMN腹腔注射肝硬化小鼠模型及CCl4灌胃肝硬化大鼠模型是2种较适合消胀贴膏外用敷脐的动物模型,腹水明显,成模率高、死亡率较低。
2.综合两种模型的药效观察,高、中、低剂量的消胀贴膏均能降低肝硬化腹水模型动物的腹水量、体重。但对其血清肝功能及肝组织病理改变不明显。
3.消胀贴膏消退腹水机制可能与降低血清NO浓度、降低VEGF的表达、改善肝脏及腹腔血管通透性有关。