背景与目的自身免疫性肝炎(Autoimmune hepatitis,AIH)是一种累及肝脏实质的,以高γ-球蛋白血症、循环中存在自身抗体、组织病理学表现为以界面性肝炎和小叶性肝炎等为特点的自身免疫性疾病。它具有遗传易感性,是诱发因素、自身抗原抗体应答、免疫调节紊乱、细胞因子网络失衡等复杂因素相互作用的结果。糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)是目前治疗AIH的常用药物,但在临床上发现,不同的自身免疫性肝炎患者对糖皮质激素治疗的反应性不同,部分患者对激素治疗不敏感,即使接受大剂量的糖皮质激素治疗,也得不到预期的治疗效果,甚至出现糖皮质激素抵抗,目前对糖皮质激素治疗不敏感,甚至激素抵抗的机制尚不完全明确,这就需要对激素抵抗机制进行进一步的探讨。糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor,GR)是糖皮质激素发挥药理和生理作用的中介物,同样的疾病个体对糖皮质激素治疗的反应不同,可能与糖皮质激素受体状态有关,以往的研究发现糖皮质激素受体前信使RNA(GRmRNA)经不同的剪接产生两种高度同源性的亚型,分别是GRαmRNA和GRβmRNA,GRαmRNA是一种配体活化的转录因子,在激素结合状态下,通过结合特异性糖皮质激素反应元件(Glucocorticold responsive element,GRE)DNA特异序列调节糖皮质激素应答基因的表达;相比而言,GRβmRNA可能是糖皮质激素效应的内源性抑制因子,使转录失活,GRβ蛋白和激素抵抗的发生相关早已被熟知,糖皮质激素受体维持一定的数量和功能,使内源性糖皮质激素在自身内环境中神经内分泌免疫系统网络中发挥一定作用,有利于疾病缓解。我们参考了国内外大量文献,结合临床治疗及观察,本研究旨在通过对糖皮质激素治疗反应不同的Ⅰ型AIH患者体内GRαmRNA和GRβmRNA表达水平的检测以及对GRβmRNA阳性和GRβmRNA阴性Ⅰ型AIH患者的实验室检查结果和临床特征的比较,更深入的了解临床激素抵抗的机制,为临床治疗提供参考。材料与方法标本选自2007年6月至2008年9月在郑州大学第一附属医院门诊及住院部就诊的Ⅰ型AIH患者55例(包括激素敏感型40例、激素抵抗型15例),均为女性,年龄21～59岁,均符合1998年国际自身免疫肝炎小组制定的AIH诊断标准,治疗前进行肝脏穿刺病理学检查协助诊断,排除肝硬化、肝癌、肝衰竭患者,前6个月内未使用过糖皮质激素治疗;20例健康体检者为正常对照组。病例组和对照组性别与年龄均无显著性差异。激素治疗前清晨8时空腹抽取3ml血液,标本取出后立即进行外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclearcells,PBMCs)的提取及后续实验操作。按TIANGEN公司提供的Trizol-A~+TotalRNA Reagen试剂盒说明书操作程序提取患者血液中的总RNA,用琼脂糖凝胶电泳(80V,0.5h)检测总RNA的28S和18S比例,以评估总RNA的完整性;用分光光度计在260/280nm测定总RNA吸光度,以计算总RNA的纯度;按Promega公司提供的RT-PCR试剂盒操作程序进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)。扩增产物用含0.5 mmol/L溴化乙锭的1.5%琼脂糖凝胶中电泳鉴定,并用DBT-08全自动凝胶成像系统对GRαmRNA和GRβmRNA扩增产物进行扫描和半定量分析;同时对Ⅰ型AIH患者的实验室检查及临床特征资料进行分析。数据以(?)±s表示,采用SPSS10.0软件进行统计学分析,用F检验进行两样本方差齐性检验,用t或t′检验及x~2检验、fisher’s精确检验进行显著性检验;相关分析采用Pearson(双变量正态分布)、Spearman(非正态分布)直线相关分析法,求相关系数r;以a=0.05为检验水准。结果1.各组总RNA提取结果良好,电泳结果证实抽提高纯度的总RNA,总RNA的吸光度OD260/OD280值均在1.8～2.0;扩增产物各个条带清晰,内参基因条带明亮。2.GRαmRNA和GRβmRNA的表达:正常对照组、激素敏感组及激素抵抗组均可检测到GRαmRNA,三组GRαmRNA的阳性表达率均为100%,正常对照组、激素敏感组、激素抵抗组三组之间GRαmRNA的表达水平无统计学意义(P＞0.05);GRβmRNA在正常对照组中阳性表达4例(20%),激素敏感组中阳性表达11例(27.5%),在激素抵抗组中阳性表达12例(80%),GRβmRNA阳性表达率在激素抵抗组和正常对照组、激素抵抗组和激素敏感组中均有统计学意义(P＜0.01)。3.血清ALT和TB水平在GRβmRNA阳性组和GRβmRNA阴性组Ⅰ型AIH患者中有统计学意义(P＜0.05);黄疸、乏力、食欲不振等的发生率在GRβmRNA阳性组和GRβmRNA阴性组中有统计学意义(P＜0.05);GRβmRNA表达与激素敏感性呈明显负相关(0R=10.545,P＜0.05)。4.GRαmRNA和GRβmRNA表达水平相关性分析,随着GRβmRNA表达水平的增高,GRαmRNA的表达水平呈下降趋势(r=-0.593,P＜0.05);GRβmRNA和ALT检测值相关性分析,随着GRβmRNA表达水平的增高,ALT的检测值呈上升趋势(r=0.512,P＜0.05)。结论1.Ⅰ型AIH患者GRβmRNA的表达增高与GC治疗抵抗有关;GRβmRNA可能是GRαmRNA的一种内源性抑制因子。2.Ⅰ型AIH患者复发率在GRβmRNA阳性组和GRβmRNA阴性组中是有显著差异的,提示GRβmRNA的表达水平和激素的不敏感性密切相关,并且GRβmRNA表达与激素敏感性呈明显负相关。3.GRβmRNA的表达在Ⅰ型AIH患者对激素的反应性方面可能作为一个新的预测指标。