【摘 要】
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目的:研究叶下珠、顶坛花椒和小叶苦丁茶三种植物的抗补体和抗补体激活诱导血管内皮细胞损伤的活性。方法:首先采用抗补体活性经典途径初步筛选样品抗补体活性,然后考察样品
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目的:研究叶下珠、顶坛花椒和小叶苦丁茶三种植物的抗补体和抗补体激活诱导血管内皮细胞损伤的活性。方法:首先采用抗补体活性经典途径初步筛选样品抗补体活性,然后考察样品补体激活诱导损伤的内皮细胞炎症的抑制活性。实验方法主要是采用CVF和正常混合人血清(NHS)按比例混合,经37℃水浴孵育制备成孵育产物(CAC),将CAC作用于内皮细胞,使得补体旁路激活导致内皮细胞损伤。利用ELISA试剂盒检测上清液中ICAM-1,VCAM-1,E-selectin,TNF-a,IL-6的表达,并采用双萤光素酶报告基因检测测定NF-κB的核内转录活性。将不同浓度的叶下珠,顶坛花椒,小叶苦丁茶各提取物的化合物以及提取物中的主要化合物提前处理内皮细胞,检测不同浓度的样品对补体旁路激活致黏附分子,炎症因子和NF-κB的核内转录表达的干预作用。结果:叶下珠醇提取物的乙酸乙酯部位、柯里拉京和鞣花酸均能明显抑制补体经典途径的溶血活性,但对补体旁路途径溶血的抑制作用不明显。而对经典途径实验进一步研究表明:乙酸乙酯部位、柯里拉京和鞣花酸干扰了补体经典途径成分C1、C2、C4形成C3转化酶的过程。柯里拉京和鞣花酸对补体旁路激活致内皮细胞炎症反应无明显作用。顶坛花椒粗提物和乙酸乙酯提取物可降低黏附分子VCAM-1的表达。乙酸乙酯部位中主要成分槲皮素及5种槲皮素的衍生物都可以抑制黏附分子ICAM-1、VCAM-1和E-selectin的表达,并且可以干预炎症因子TNF-a表达,并能够抑制NF-κB转录活性。顶坛花椒各段提取物对经典途径抗补体活性作用效果不明显。小叶苦丁茶总苷对补体旁路激活致内皮细胞炎症反应无明显作用,而小叶苦丁茶50%甲醇提取物有一定的抑制作用。通过对苦丁茶50%甲醇提取物的进一步分离提取,得到化合物阿克苷。而不同浓度的阿克苷可明显降低粘附分子ICAM-1、VCAM-1和E-selectin的表达,对炎症因子TNF-a和IL-6表达有明显抑制作用,并能够抑制NF-κB转录活性。小叶苦丁茶各段提取物对经典途径抗补体活性作用效果不明显。结论:叶下珠醇提取物的乙酸乙酯部位、柯里拉京和鞣花酸均明显抑制补体经典途径的溶血活性,其机制与这些组分影响经典途径C3转化酶的形成有关。顶坛花椒提取物的几种黄酮类组分和小叶苦丁茶提取物中的阿克苷能够有效的抑制补体旁路激活引起得炎症因子和粘附分子的表达,其原理可能是阻碍NF-κB信号通路的活化来完成的。
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