甜菜夜蛾性信息素结合蛋白的RNA干扰及嗅觉受体基因的表达谱

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiandancaozuo
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昆虫在长期进化过程中形成了高度灵敏的嗅觉系统,并以此来感受自然环境中的各种化学信息,产生相应的生理和行为反应,如寻找配偶、食物源和栖息场所、产卵行为、逃避危险或者不适合的栖息地和寄主等。将昆虫嗅觉应用于害虫防治,已成为害虫管理的一个重要手段,并将在未来害虫治理中起到越来越重要的作用。深入研究蛾类昆虫性信息素通讯的分子机制,弄清性信息素感受相关蛋白的功能,对于针对特定嗅觉蛋白设计和开发更为高效的基于两性通讯的害虫调控技术,至关重要。昆虫信息素结合蛋白(PBP)及受体蛋白(OR)被认为在性信息素感受中起重要作用,但目前为止在活体昆虫内进行该类蛋白功能的研究国内外还没有报道。在课题组前期成功克隆出甜菜夜蛾性信息素结合蛋白1(SexigPBP1)和信息素受体蛋白2(SexiOR2)全基因序列的基础上,本研究重点利用RNAi技术对SexigPBP1基因的功能进行了研究,同时对嗅觉受体蛋白SexiOR2和SlitOR2的组织分布进行了调查,主要结果如下:1)设计引物并通过RT-PCR扩增出530 bp的SexiPBP1 DNA片段,并以此为模板合成用于RNAi的双链SexiPBP1RNA。2)通过腹腔注射法将双链RNA导入到初羽化雄蛾体内,48小时后的RT-PCR和qRT-PCR的检测结果表明,处理试虫触角内SexigPBP1基因的表达量被敲减了约90%,同时处理试虫死亡率和对照相比没有明显差异。说明该方法可以有效沉默昆虫PBP基因的表达,从而进行相关功能研究。3)进一步的触角电位(EAG)检测结果表明,RNAi处理48小时后,雄蛾对雌蛾性信息素主组分Z9,E12,14:Ac的EAG反应降低了约60%,直接证明SexigPBP1在雄蛾对该组分的感受中起重要作用。这是首次应用RNA干扰技术对蛾类昆虫PBP功能的研究报道。4)通过设计特异性引物,以RT-PCR方法对嗅觉受体基因SexiOR2和SlitOR2分别在甜菜夜蛾和斜纹夜蛾中的组织表达谱进行了分析。结果表明,SexiOR2和SlitOR2基因只表达于雌雄蛾的触角中,在头、胸、腹、足、喙、翅等其他部位没有表达。
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