第一部分:STAT3基因在神经发育过程和COS7细胞中的表达与功能研究.该文首先利用免疫组化方法观察E10.5至P1期间Stat3蛋白在中枢神经系统和眼睛中的表达模式,发现其表达区域随发育进行而变化,并且其活性形式——酪氨酸磷酸化的Stat3Y705蛋白在神经管发育中的分布较Stat3蛋白更局限在一些特定的区域.其次,蛋白免疫印迹实验表明Stat3蛋白及Stat3Y705蛋白在E10.5至P20小鼠大脑,神经管,小脑,视网膜和晶状体的各发育阶段都存在,而且它们的表达水平随发育进行而变化.另一方面,分别通过免疫细胞化学染色、免疫沉淀结合免疫印迹及瞬时转染Stat3特异识别元件所指导的报告基因等方法,从Stat3蛋白的胞内分布、酪氨酸磷酸化及与特异识别元件的结合活性三方面说明COS7细胞中存在活性Stat3蛋白的表达.Stat3 cDNA和报告基因在COS7细胞中的共转染实验表明,外源的Stat3蛋白具有DNA结合活性,并可增强报告基因的表达.第二部分:小鼠巢蛋白基因(Nestin)的表达与功能研究.该文首先建立了稳定转染小鼠Nestin cDNA全长的NIH/3T3细胞株,RT-PCR结果显示细胞中存在Nestin mRNA的过量表达,但蛋白免疫印迹实验不能检测出Nestin蛋白质的表达.将去除5和3非翻译区序列的Nestin cDNA开放阅读框与EGFP的融合蛋白表达质粒瞬时转染COS7和NIH/3T3细胞,免疫染色结果显示EGFP-Nestin融合蛋白能过量表达,而且呈典型的纤维状细胞骨架结构.神经元的生长锥是神经突末端的高度能动结构,介导了神经突的生长和导向作用,主要含有两种细胞骨架成分:肌动蛋白丝(F-actin)和微管.我们通过抗体免疫荧光染色发现Nestin在分化中的P19神经元的神经突及生长锥中分布.在原代培养的小鼠小脑颗粒细胞中,Nestin/MAP2或Nestin/GAP43免疫荧光双标记显示,Nestin在颗粒细胞的神经突以及生长锥的中心区域存在较强的分布.而随着神经元细胞间联系的建立,神经突中Nestin的分布从远端逐渐向胞体消失.