本论文采用中国吉林省长白山人参种植地的土壤,从中筛选出产人参皂苷Rb1水解酶的的微生物,并对微生物的发酵条件、酶的分离纯化、提纯酶的酶性质和特异性进行了研究。经过筛选,得到能产人参皂苷Rb1水解酶的的微生物,其发酵条件为,发酵培养基:胰蛋白胨10g,酵母膏5g,氯化钠10g,水1L;最佳诱导物为人参总皂苷;诱导物加入量为3.2mg人参总皂苷/mL培养基;最佳培养温度为28℃;接菌量为250μL菌液/20mL培养基。对发酵曲线的研究表明,产酶的发酵时间应控制在对数生长期的后期,即20～25h。人参皂苷Rb1水解酶经DEAE-Cellulose DE52柱进行分离纯化,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测显示为单一条带,确定其酶蛋白分子量约为47KDa。将提纯后的人参皂苷Rb1水解酶进行酶性质研究,得到最适pH值是4.0,并在pH2.2～pH10范围内稳定;最适反应温度是25℃,并在20℃～60℃范围内稳定。Fe3+离子对酶反应激活作用显著,Cu2+离子对酶反应有抑制作用,而K+、Na+、Mg2+、Zn2+和Ca2+离子都对酶反应无作用。酶反应动力学方程为V=0.0423[S]/(1.045+[S]),最大反应速率 Vmax=0.0423mmol/L·h,米氏常数 Km=1.045mmol/L。对提纯酶进行底物特异性研究,结果表明此酶对人参二醇类皂苷和淫羊藿苷有水解作用,并能分步水解人参二醇类皂苷C20位上的葡萄糖苷键,水解人参皂苷Rb1经过人参皂苷Rd最终生成人参皂苷Rg3。同时此酶不具有α-淀粉酶的水解能力,只对pNP-β-D-Gal的半乳糖苷键有很弱的水解能力,而对pNP-α-D-Gal、pNP-β-D-Glc、pNP-α-D-Glc和pNPR中的糖苷键均无水解能力,说明此酶为一特异性酶。