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目的:探讨经TNF-α处理后,NF-κB在椎间盘细胞的细胞质与细胞核之间的移动情况及地塞米松对其抗炎抑制机制。
材料与方法:原代分离培养椎间盘细胞至第三代以内,然后随机分为四组,A:对照组,B:经TNF-α处理组,C:经地塞米松处理组,D:经TNF-α和地塞米松联合处理组。四组各经10分钟,1小时,2小时处理后,分别分离萃取椎间盘细胞的细胞质与细胞核内蛋白质。通过免疫蛋白印记反应,检测细胞质与细胞核内p50,p52,p65,p100的蛋白表达量。另外,利用1小时处理的四组细胞进行免疫荧光染色,观察p50,p52,p65的染色及定位情况。
结果:免疫蛋白印记反应结果显示,细胞质内的p50和p65,在1小时处理后的B组和D组表达量减少,而其他组与对照组相比较无显著差异。细胞核内p50在1小时处理后的B组(10.99倍)和D组(7.24倍)中表达量显著增高,并且B组的表达量高于D组;2小时处理后的B组(12.33倍)的表达量比1小时增高,但D组(7.46倍)的表达量与1小时相比无显著差异。在细胞核内,p65在1小时处理后的B组(7.49倍)和D组(6.79倍)中表达量也显著增高,并且B组的表达量也高于D组;但2小时的B组(4.13倍)和D组(4.13倍)与1小时B组(7.49倍)和D组(6.79倍)相比较时表达量减少。细胞质内的p100,在1小时的B组和D组表达量减少,而其他组与对照组相比较时无显著差异;细胞核内的p100仅在2小时的B组,C组,D组表达。细胞质内的p52,在10分钟,1小时,2小时的B组,C组,D组与对照组相比较时无显著差异;细胞核内p52,在1小时的D组没有表达,而2小时的D组(0.08倍)有所表达且表达量少于对照组。免疫荧光染色结果与1小时的免疫蛋白印记反应结果相一致。
结论:转录因子NF-κB在TNF-α处理的椎间盘细胞中主要以经典途径传导,但也涉及到旁路途径。地塞米松对TNF-α处理的椎间盘细胞转录传导的抗炎抑制作用开始于1小时,并且抑制p50,p52,p65的转导和相应基因的表达。
材料与方法:原代分离培养椎间盘细胞至第三代以内,然后随机分为四组,A:对照组,B:经TNF-α处理组,C:经地塞米松处理组,D:经TNF-α和地塞米松联合处理组。四组各经10分钟,1小时,2小时处理后,分别分离萃取椎间盘细胞的细胞质与细胞核内蛋白质。通过免疫蛋白印记反应,检测细胞质与细胞核内p50,p52,p65,p100的蛋白表达量。另外,利用1小时处理的四组细胞进行免疫荧光染色,观察p50,p52,p65的染色及定位情况。
结果:免疫蛋白印记反应结果显示,细胞质内的p50和p65,在1小时处理后的B组和D组表达量减少,而其他组与对照组相比较无显著差异。细胞核内p50在1小时处理后的B组(10.99倍)和D组(7.24倍)中表达量显著增高,并且B组的表达量高于D组;2小时处理后的B组(12.33倍)的表达量比1小时增高,但D组(7.46倍)的表达量与1小时相比无显著差异。在细胞核内,p65在1小时处理后的B组(7.49倍)和D组(6.79倍)中表达量也显著增高,并且B组的表达量也高于D组;但2小时的B组(4.13倍)和D组(4.13倍)与1小时B组(7.49倍)和D组(6.79倍)相比较时表达量减少。细胞质内的p100,在1小时的B组和D组表达量减少,而其他组与对照组相比较时无显著差异;细胞核内的p100仅在2小时的B组,C组,D组表达。细胞质内的p52,在10分钟,1小时,2小时的B组,C组,D组与对照组相比较时无显著差异;细胞核内p52,在1小时的D组没有表达,而2小时的D组(0.08倍)有所表达且表达量少于对照组。免疫荧光染色结果与1小时的免疫蛋白印记反应结果相一致。
结论:转录因子NF-κB在TNF-α处理的椎间盘细胞中主要以经典途径传导,但也涉及到旁路途径。地塞米松对TNF-α处理的椎间盘细胞转录传导的抗炎抑制作用开始于1小时,并且抑制p50,p52,p65的转导和相应基因的表达。