【摘 要】
：
鳜鱼（Siniperca chuatsi）,是我国淡水养殖名贵鱼类,有重要的经济价值。目前关于神经肽调节鳜鱼生殖生理的研究报道不多。本试验通过提取鳜鱼脑组织总RNA,应用普通PCR扩增和RACE技术克隆KISS-1和NUCB2基因完整cDNA序列,应用免疫荧光双染技术和实时荧光定量PCR技术,分析由上述两个基因控制的神经肽Kisspeptin和Nesfatin-1在鳜鱼早期胚胎发育的分布表达和不同
论文部分内容阅读
鳜鱼（Siniperca chuatsi）,是我国淡水养殖名贵鱼类,有重要的经济价值。目前关于神经肽调节鳜鱼生殖生理的研究报道不多。本试验通过提取鳜鱼脑组织总RNA,应用普通PCR扩增和RACE技术克隆KISS-1和NUCB2基因完整cDNA序列,应用免疫荧光双染技术和实时荧光定量PCR技术,分析由上述两个基因控制的神经肽Kisspeptin和Nesfatin-1在鳜鱼早期胚胎发育的分布表达和不同性腺发育期的m RNA组织表达变化。以期从神经内分泌角度探索神经肽Kisspeptin和Nesfatin-1对鳜鱼生长发育的调控作用,为完善和改进鳜鱼的人工养殖和繁育技术提供基础理论数据。（1）通过PCR扩增和RACE技术克隆得到KISS-1基因完整cDNA序列,共318bp,编码105个氨基酸残基,信号肽为前20个氨基酸,总蛋白分子量为11675.46,理论等电点9.93。预测的鳜鱼Kisspeptin核心功能区域Kisspeptin-10序列为YNLNSFGLRY-NH2,在脊椎动物中高度保守。（2）通过PCR扩增和RACE技术克隆得到NUCB2基因长1755bp的完整cDNA序列,该序列含有80bp的5′非翻译区,1467bp编码区,209bp的3′非翻译区。共编码488个氨基酸残基,前23个氨基酸为信号肽区,总蛋白分子量为57639.79,理论等电点为4.86。肽区可分为82个氨基酸的Nesfatin-1,71个氨基酸的Nesfatin-2和308个氨基酸的Nesfatin-3。其中核心功能片段Nesfatin-1的M30区域氨基酸序列在脊椎动物中保守性较高,鱼类中高度保守。（3）免疫荧光双染结果显示,Kisspeptin和Nesfatin-1在鳜鱼囊胚期就开始表达,出膜前期,两个神经肽随着胚胎发育从胚盘处迁移至不同胚层,出膜后在脑、眼、脏器、尾柄和胸鳍均有分布。qPCR结果也发现在胚胎发育不同时期,Kisspeptin和Nesfatin-1的m RNA表达均有变化,Kisspeptin在卵黄囊未消耗前所有时期,表达量显著低于开口摄食期;Nesfatin-1的表达量在胚胎发育整个阶段低,开口时期更是显著低于其他胚胎发育期。免疫荧光显示Kisspeptin和Nesfatin-1在出膜前分布和迁移有差异,在开口摄食期分布几乎重合,qPCR检测结果显示在开口期Kisspeptin m RNA显著上调表达（P＜0.05）,Nesfatin-1显著下调表达（P＜0.05）,证明两个基因对鳜鱼胚胎发育调控存在时间和空间差异。（4）qPCR技术检测Kisspeptin和Nesfatin-1的m RNA在雌雄鳜鱼Ⅱ期各组织表达差异,结果显示Kisspeptin在雌性肝脏和鳃丝显著最高表达（P＜0.05）,在雄性精巢表达最高（P＜0.05）,在雌、雄鱼脑部低表达（P＜0.05）,在肝脏,性腺,肠道,鳃丝和中肾处组织表达存在性别二态性。Nesfatin-1在雌、雄鳜鱼肝脏表达量最高,在雄鱼精巢处也有较高表达,在性腺组织的表达存在性别二态性,在其他组织器官的表达性别差异不明显。初步证实Kisspeptin-1和Nesfatin-1对鳜鱼能量调控和性腺发育起调控作用。（5）利用qPCR技术检测Kisspeptin和Nesfatin-1在雌、雄鳜鱼性腺发育Ⅲ-Ⅴ期脑、肝脏、性腺中m RNA的表达。结果显示在各个时期,Kisspeptin在性腺均显著高表达（P＜0.05）,随着性腺发育在卵巢显著上调表达（P＜0.05）,精巢显著下调表达（P＜0.05）,Ⅴ期雌性肝脏显著上调表达（P＜0.05）,Ⅳ雄性的肝脏和脑部也显著高表达（P＜0.05）。Nesfatin-1在Ⅲ-Ⅴ期雌、雄鳜鱼肝脏处显著最高表达（P＜0.05）,在精巢也有较高表达且随着精巢发育表达量显著上调（P＜0.05）,在脑部雌、雄鳜鱼Nesfatin-1相对表达较低,时序性的表达无显著变化（P＞0.05）。进一步证实Kisspeptin和Nesfatin-1可能直接参与调控鳜鱼能量代谢和性腺发育。
其他文献
肌肉和脂肪细胞的增殖和分化水平与动物体的生长和发育密切相关,是影响肉质的关键因素。长链非编码RNA（lncRNA）可以与微小RNA（mi RNAs）海绵参与许多重要的生物过程。课题组前期测序得到的新的lncRNA TCONS＿00056481,cis作用预测其靶基因为IRS1。在此基础上,为研究lncRNA竞争性结合mi RNA调控靶基因对猪前体脂肪细胞增殖和分化过程的影响,首先通过生物信息学分析
猪人工授精是指利用人工方法采集公猪的精液，经过显微镜检查，精液稀释、分装、保存，将合格的精液输入发情母猪生殖道内，使之受孕的一种方法。人工授精能充分利用优良公猪，加速猪群品种改良，大大减少公猪的饲养数量，提高了养猪经济效益。
仔猪腹泻是影响哺乳或断奶仔猪死亡的主要原因,给养猪业带来了极大的经济损失。近年来研究表明,肠道菌群是引起仔猪腹泻的重要原因,腹泻与仔猪肠道菌群失调互为因果。本研究以安徽优秀地方猪种—皖南黑猪断奶仔猪为研究对象,利用16s r RNA扩增子测序及代谢组学技术,分别对健康仔猪不同肠段肠道菌群的结构和多样性变化、腹泻与健康仔猪不同肠段微生物结构和多样性差异以及腹泻与健康仔猪仔猪粪便代谢谱差异进行分析,主
自从中华人民共和国进入改革开放的时代,我们国家的经济发展也由此走上了快车道,我们国家的居民生活水平也在日新月异的提高,社会主义在中国大陆也步入了越来越美好的全新的时代背景。居民的收入和储蓄也正在以可观的速度持续上涨,伴随着中国金融业发展的日益成熟与完善,权益投资的重视程度的优先级日益提升,对市场上的资金的吸引力越来越强。不仅如此,中国的二级市场的投资,对中国的宏观经济调控的措施的补充也起到了不可磨
猪是畜牧生产和生物医学研究中重要的经济与模式动物,早期胚胎体外生产是优良种猪繁育和生物医学模型猪制备的关键环节,但体外生产的猪胚胎发育能力远不及自然受精和其他物种的体外生产胚胎,主要原因是对猪早期胚胎发育中表观遗传调控机制缺乏足够的了解。组蛋白精氨酸甲基化作为一种真核生物表观遗传修饰在细胞分化和发育中有重要调控作用。最近研究发现,CARM1特异性催化产生的H3R17me2a参与调控小鼠早期胚胎发育
1990年,联合国开发计划署从健康、收入和文化教育三个维度建立了人类发展指数（Human Development Index,HDI）,将其作为衡量人类生活福祉的综合指数。自提出以来,人类发展指数（HDI）受到各国的广泛认可。但是,由于其在构建过程中没有对环境维度及民生维度进行考量,因而,HDI在被广泛使用的同时也遭到些许质疑。生态文明与民生建设,是惠及居民生活最有效的方式。“十四五”规划提出,要
作为实现宽带无线通信高可靠性的关键技术，越区切换的性能优劣将会严重影响列车的行车安全和用户体验。由于传统蜂窝小区制的通信系统已不再适用于高速铁路，对此利用分布式天线系统（distributed antenna systems,DAS）和两跳架构，构建适用于高速铁路场景的系统网络架构。针对架构中不同集中单元（central unit,CU）控制的远程天线单元（remote antenna unit,
目的:探究心理干预对呼吸衰竭ICU患者的插管率、气血指标的影响。方法:选取2018年1月至2019年12月本院重症监护病区（ICU）呼吸衰竭患者90例,均分成JC组（基础护理干预）和YZ组（心理干预）,患者比例1:1,均为45例,比较JC组和YZ组插管率、肺功能及护理管理情况。结果:YZ组患者PaCO2、pH值相对于JC组更低（P＜0.05）,YZ组患者PaO2、SaO2及氧合指数指标水平均明显高
伴随着黑龙江省“两牛一猪”项目的推进，黑龙江肉牛产业得以迅速发展，人工授精技术在肉牛养殖过程中逐渐变成了最主要的繁殖技术之一。肉牛人工授精是指人为地使用特殊的器械采集公牛的精液，经过技术处理、保存后，借助器械在母牛发情时期将精液注入子宫内，以达到受孕的目的。人工授精受胎率的高低直接影响养殖者的经济收入，受胎率的高低与多种因素有关。文章主要从母牛体况、母牛健康、母牛营养、精子活力、精液贮存、输精时间