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细胞周期调控在正常哺乳动物细胞的生长中具有关键作用。肿瘤细胞最基本的正常生物学行为改变就是对细胞周期的调节失去控制。现在一般认为具有活性的Cdk4-Cyclin D1复合物可以帮助细胞通过细胞周期中的限制点R，在越过这一点之后，细胞将会进入下一轮的复制。到目前为止获得的证据表明，Cdk4是促使细胞通过R点的“基本元件”。已经证明P16INK4a能够将细胞阻滞在G1期，但外源性的P16基因将如何影响Cdk4和Cyclin D1仍需进一步的研究。本实验对外源性野生型P16基因对癌细胞生长的影响作了研究。同时用免疫细胞化学和RT-PCR的方法检测了细胞中与细胞周期调节相关的P16，Cdk4, Cyclin D1和Rb基因在蛋白水平和转录水平的表达变化。所有这些结果都证明了外源野生型P16基因对癌细胞的细胞周期调节具有负面作用，能够阻遏细胞的恶性增殖。方法：采用pcDNA3质粒进行转染，该质粒含有野生型P16基因片段和新霉素抗性基因。转染后，用含有800μg/ml G418的培养基筛选，得到转染成功的细胞。用流式细胞仪分析细胞的细胞周期分布。与细胞周期调控相关的P16，Cdk4, Cyclin D1和Rb基因的蛋白表达通过免疫组化法检测，并用RT-PCR法分析这几种基因在转录水平的表达情况。结果：细胞生长分析显示，在外源野生型P16基因转染膀胱癌细胞以后，癌细胞的增殖受到了抑制。从免疫组化结果来看，未转染P16基因的EJ细胞核中Cdk4强烈表达，Cyclin D1和Rb也呈阳性染色，但P16基因着色很浅；转染P16基因的癌细胞核中，Cdk4, Cyclin D1和Rb基因的蛋白表达为阴性，而P16基因的蛋白表达在细胞核和细胞质中都显著的增加。RT-PCR结果表明，转染P16基因的细胞中P16基因的转录显著增加，而另外三种基因，Cdk4, Cyclin D1和Rb基因的转录则显著减少。结论：实验结果显示，将外源的野生型P16基因转染到人膀胱癌细胞中，对细胞的增殖产生了抑制作用。细胞中表达增加的P16蛋白抑制了细胞核中Cdk4, Cyclin D1和Rb<WP=7>蛋白的表达，使细胞周期被阻滞在G0/G1期。因此，外源的P16基因导入对膀胱癌细胞的恶性增殖具有负面作用，在今后的肿瘤基因治疗研究中具有重要地位。