肾细胞癌是肾肿瘤的最常见病，发病率居泌尿系肿瘤的第二位。肾细胞癌具有天然耐药基因MDR—1，肾癌细胞内的P170蛋白可将细胞内的化疗药物泵出细胞外。因此，肾癌对化疗药物无论是单用或多药联合应用有效率低，同时，肾癌对放射治疗不敏感，免疫治疗疗效不确切，外科手术切除是目前治愈肾癌的唯一手段。患者术后的后续治疗及晚期患者的治疗已成为临床工作中的一大难题。 氯通道广泛存在于细胞膜和细胞器膜。ClC—型氯通道组成了一个独立的蛋白家族，存在于几乎所有组织中，参与组织和细胞许多生理功能，与细胞PH、体积、细胞增殖和分化、细胞兴奋性等多种细胞过程的有关。肾脏的氯通道参与了重要的生理功能，哺乳动物中的八种ClC氯通道中，已知三种：ClC—K1，ClC—K2和ClC—5与人和鼠的肾脏疾病有关。但是，目前有关氯通道与肾癌之间的报道尚未见到。 本实验旨在研究氯通道阻断剂NPPB川FA对人肾癌细胞系GRC—1增殖的抑制作用，为肾癌的药物治疗提供新的理论依据。 本实验的方法： 第一部分：细胞形态学观察 1．倒置光学显微镜下观察细胞生长情况 2．透射电镜超薄切片观察细胞超微结构 第二部分：细胞功能检测 1．细胞活力的检测（MTT比色试验） 2．流式细胞仪测定细胞增殖周期 3．激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内 Ca’“变化 结果： 1．倒置光学显微镜示氯通道阻断剂NPPB、NFA可使人肾癌细胞株GRC—l的细胞体积缩小，细胞间隙增大，形态发生异常，增殖受到抑制。 二．透射电镜扫描细胞超微结构显示，NPPB、NFA能促使人肾癌细胞株GRC—l的细胞凋亡。 3．MTT LL色实验表明：NPPB 50 u mol·L‘、NPPB 100 u mol·卜－‘和NFA50 nmol·L’、NFA100 umol·L’对人肾癌细胞株GRC—1增殖的抑制作用明显，去除NPPB、NFA后，细胞可恢复增殖。 4．流式细胞仪测定细胞增殖周期NPPB、NFA使大部分细胞停滞于G；；／G；期，提示它们的作用点在G；乃检查点。 5．激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内 Ca卜变化提示 100uM／LNPPB、NFA可降低人’肾癌细胞株mC一1细胞内k‘“荧光强度。 J日x丁tmeI7t Of Urojogy，T8gh rospjtal6 本实验表明： 氯通道阻断剂NPPB、NFA对人肾癌细胞株GRC—l的增殖具有明显的抑制作用，其作用机制可能是NPPB、NFA使大部分细胞停滞于 G；；／G；期，提示 NPPB、NFA的作用点在G；乃检查点；它们可降低细胞内Ca’“，促使细胞凋亡。