丝素蛋白材料对DNA在高温及紫外破坏下保护作用的研究

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脱氧核糖核酸(DNA)被广泛应用于基因诊断,身份鉴别,医学开发以及物种研究等众多领域,而DNA却对高温,pH值,辐射,紫外线以及脱氧核糖核酸降解酶(DNase)等因素非常敏感,这使得在不同条件下对DNA的长期保存及运输非常不便,常常需要将DNA样品保存于冰箱或液氮中,限制了DNA的研究和发展。在本研究中,我们用丝素蛋白材料对总DNA(人成纤维细胞中提取)进行了保存,并研究经丝素蛋白材料保存的DNA在不同破坏条件下(高温,紫外)的稳定性。本文通过对滤纸进行丝素蛋白涂层,以及用甲醇溶液对经丝素蛋白涂层后的滤纸进行后处理工艺,制备了两种不同的丝素蛋白涂层滤纸。通过红外光谱检测了几种不同滤纸膜抽提液的丝素蛋白分子结构,并通过扫描电镜(SEM)检测了这几种滤纸膜的表面形态。随后将DNA/Silk混合液滴入滤纸中(Silk/DNA+filter)或经甲醇处理过的丝素蛋白涂层滤纸(Silk/DNA+PT-filter)中,以上样品经通风干燥后用超纯水进行抽提。最后我们用凝胶电泳对以上样品进行检测,结合温度稳定性以及紫外破坏实验可以得出以下结论:6%Silk/DNA+PT-filter样品对DNA保存效果较3%Silk/DNA+filter样品以及DNA+filter更好,在37oC保存40天后,仍然能保留40%的DNA;在紫外(245 nm)照射10小时后仍然能保留10%的DNA。而使用TBE缓冲液也能够加强DNA的保存或抽提。经过丝素蛋白涂层滤纸膜保存的DNA也可用作ZNF750基因PCR扩增反应的模板,扩增产物也可用于基因测序。尽管Silk/DNA冻干粉样品也能在不同条件下有效的保存DNA,但丝素蛋白涂层滤纸保存DNA体系更加简单方便,不需要特殊的设备和温度制备,能更好的应用于不同领域。综上所述,本研究通过对滤纸进行丝素蛋白涂层以及甲醇后处理,以此为基础建立了丝素蛋白涂层滤纸DNA保存体系,该丝素蛋白材料能够在不同条件下有效的保存DNA,为DNA保存材料的开发提供了新选择,促进了DNA的研究和发展。
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