木霉厚垣孢子的液体发酵及其可湿性粉剂研制

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比较了实验室所保存的3株木霉生产厚垣孢子的能力。这三株分别是T-3长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum),t-33黄绿木霉(T.aureoviride)和康奈尔株康氏木霉(T.koningii)。通过在同一培养条件下,5mm的菌丝块接种在装有50mLPD培养基的三角瓶中(100mL规格),分别在不同温度下培养,结果发现T-3菌株的产孢量最高,T-33次之,而康奈尔的厚垣孢子产量最低。选择T-3作为本研究的出发菌株,系统研究了木霉厚垣孢子的液体发酵、萌发、贮存条件和厚垣孢子可湿性粉剂的研制以及厚垣孢子制剂对辣椒猝倒病的防病作用。厚垣孢子产生条件的研究结果表明,T-3菌株形成厚垣孢子的温度范围在25℃-30℃,最佳产孢温度为28℃;震荡速度为140r/min时有利于厚垣孢子的产生,在0转速的情况下几乎不产生厚垣孢子。对温度、pH、转速,进行了3水平3因素的正交实验。实验筛选出最佳组合为:30℃、pH5、160r/min。极差分析表明这3个因素中对厚垣孢子产孢量影响程度的顺序为:转速>温度>pH。研究了时间、温度、光照、pH、湿度、液体基质等因素对厚垣孢子萌发率的影响。厚垣孢子在清水琼脂玻片上12个小时左右,全部萌发。厚垣孢子的最佳萌发温度范围是25℃-30℃。黑暗条件下厚垣孢子的萌发率高于光照条件下厚垣孢子的萌发率。厚垣孢子在pH2-pH10之间都能萌发,但在酸性条件下的萌发率高于在碱性条件下的萌发率,最佳萌发pH范围在pH3-pH7。厚垣孢子在高湿度的环境中有利于厚垣孢子的萌发。在厚垣孢子浆烘干实验中,烘干前厚垣孢子浆与载体比重为7:1,烘干后比重约为0.34:1,厚垣孢子粉的含量约为25%,烘干温度为45℃,烘干时间为7-8h。对厚垣孢子可湿性粉剂的载体种类、润湿剂的种类、润湿剂的量、分散剂的种类、分散剂的量等进行了单因素的筛选,其结果为:载体:硅藻土,润湿剂:十二烷基硫酸钠:4%,分散剂:NNO 4%,皂角粉:9%。对最佳单因素条件筛选后进行了正交实验,得到厚垣孢子可湿性粉剂的组成为:厚垣孢子粉20%、十二烷基硫酸钠5%、NN03%、皂角粉7%。对厚垣孢子可湿性粉剂进行了质量检测:润湿时间为52s,总悬浮率为78.66、孢子悬浮率为80%、水分含量为2.21%,细度为98%过200目筛。厚垣孢子粉,厚垣孢子浆以及厚垣孢子可湿性粉剂中的孢子数量和萌发率随贮存时间的延长而降低。4℃下保存8个月后,厚垣孢子的含量约为1.8×108个/g,萌发率65.3%;厚垣孢子可湿性粉剂中的孢子含量为1.1×108个/g,萌发率为53.1%。室内盆栽实验中,木霉厚垣孢子可湿性粉剂以及木霉麦麸培养物对辣椒种子出苗有提高的作用。播种30d之后调查辣椒猝倒病发病率,结果显示木霉麦麸培养物、厚垣孢子可湿性粉剂对猝倒病有较好的控制作用。
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