卵泡发育过程中伴随着大量卵泡的退化,卵泡在到达排卵之前所发生的退化过程即卵泡闭锁(atresia)。卵泡闭锁是卵泡形成以后生殖细胞退化的主要方式,在所有的脊椎动物中都发现了卵泡闭锁现象,而且绝大多数卵泡都以闭锁的方式消失了。卵泡闭锁是多因素参与的复杂调控过程,动物实验已证实了某些因子的调控作用,但卵泡闭锁的机制仍有待于进一步的研究,其对控制人类生育、提高辅助生殖助孕技术的妊娠率、提高家畜繁殖率、阐明某些与排卵障碍有关疾病的机理都具有重要指导意义。本研究选用3-5mmm直径的猪卵泡,首先通过外观判定,卵泡腔颗粒细胞计数以及卵泡液中孕酮、雌二醇比例的测定三种方法对其闭锁程度进行分类；然后检测了健康和早、晚期闭锁卵泡中一系列类固醇合成酶基因以及相关激素受体基因表达量的变化,分析了这些基因表达量彼此间,及其与卵泡生理指标变化间的相关性,分析了类固醇合成酶系统在有腔卵泡闭锁中的调控作用。研究结果如下：1、建立了判断猪卵泡闭锁程度的统一方法。本研究通过“外观判断+颗粒细胞密度+孕激素/雌激素比例”三个指标综合检测和判定分别处于健康、早期闭锁和晚期闭锁三阶段的卵泡。具体判断标准包括：1)外观标准：健康的卵泡呈清澈粉红色,卵丘卵母细胞复合体清晰可见,颗粒细胞层完整；早期闭锁卵泡呈较浑浊的暗橘黄色,卵丘卵母细胞复合体难以辨认,颗粒细胞层有破皱和部分脱落；晚期闭锁的卵泡呈浅浑浊的灰色,卵丘卵母细胞复合体脱落,颗粒细胞层严重脱落并沉积。2)颗粒细胞密度标准：健康组密度<2500个/μL;早期闭锁组密度在2500-10000个/μL间；晚期闭锁组密度>10000个/μL。3)激素比例标准：健康组P4/E2<5;早期闭锁组5<P4/E2<20;晚期闭锁组P4/E2>20。2、检测了猪卵泡闭锁过程中类固醇激素合成酶及相关受体的基因表达量变化。本实验提取了健康、早期闭锁和晚期闭锁三阶段猪卵泡总RNA,利用Real Time RT-PCR对STAR、CYP11、CYP 17、HSD3β、CYP 19、FSHR、LHCGR、AR和PGR共9个基因的表达变化进行检测：1)STAR在健康组中表达量较高,随着闭锁程度加深逐渐降低；2)CYP11在健康组中表达量较低,随着闭锁程度加深逐渐升高,健康、早期闭锁两组与晚期闭锁组间差异显著；3)CYP17在健康组中表达量较高,随着闭锁程度加深逐渐降低；4) HSD3B在健康组中表达量较低,早期闭锁组中小幅下降,晚期闭组中升高；5)CYP19在健康组中表达量较高,随着闭锁程度加深逐渐降低,健康组与早、晚期两组闭锁的卵泡间差异显著；6) FSHR在健康组表达量较高,早期闭锁组骤降,晚期闭锁组有少量升高,健康组与早、晚期闭锁两组卵泡间差异显著；7)LHCGR在健康组中表达量较高,早期闭锁组降低,在晚期闭锁组有所升高；8)PGR在健康组中表达量较低,早期闭锁组有所下降,晚期闭锁组中忽然升高,健康、早期闭锁与晚期闭锁组间差异显著；9)AR在健康组中表达量较低,随着闭锁加深逐渐升高,健康、早期闭锁两组与晚期闭锁组间差异显著。3、阐明了猪卵泡闭锁过程中卵泡生理指标、类固醇激素合成酶及相关受体表达量间的相关关系。颗粒细胞密度与P、E含量比值的相关系数为0.438,呈显著正相关；与CYP19表达量的相关系数为-0.461,呈显著负相关；与CYP11的相关系数为0.690,呈极显著正相关。P含量与CYP11相关系数为0.467,呈了极显著正相关；与HSD3B的相关系数为0.539,呈极显著正相关；与FSHR的相关系数为-0.385,呈显著负相关；与PGR的相关系数为0.368,呈显著正相关；P含量与其他基因表达量无显著相关性。E含量与STAR表达量的相关系数为0.456,呈显著正相关；与CYP19的相关系数为0.446,呈显著正相关；与LHR的相关系数为0.684,呈极显著正相关；E与其他基因无显著相关性。STAR与LHR的相关系数为0.575,呈极显著正相关；CYP11与HSD3B的相关系数为0.386,呈显著正相关；与PGR的相关系数为0.525,呈极显著正相关；与AR的相关系数为0.369,呈显著正相关；HSD3B与PGR的相关系数、为0.706,呈极显著正相关；CYP19与FSHR的相关系数为0.361,呈显著正相关；与LHR的相关系数为0.434,呈显著正相关；AR与PGR的相关系数为0.575,呈极显著正相关；其他基因表达量间无显著相关性。4、分析了卵泡闭锁几种判定指标间的一致性外观判断的指标与颗粒细胞密度指标间有高度一致性；单一的雌二醇含量指标与卵泡外观判断的结果有显著相关性；单一的孕酮含量指标与卵泡外观判断的结果没有直接关系；P/E指标结合了孕酮和雌二醇两个因素,与卵泡外观判断的结果有显著相关性,起到了对单一孕酮和雌二醇因素的校正作用。